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实验6小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察
目的与要求 1、掌握脊椎动物骨髓细胞染色体标本制备的方法; 2、了解小鼠骨髓细胞染色体的形态和数目。 实验原理 小鼠骨髓细胞始终保持较强的分裂活性,且细胞数量较多。 内容与方法 作业与思考题 1、绘制一个你所观察到的小鼠骨髓细胞染色体中期分裂相。 2、本实验中秋水仙素、低渗液、固定液各起什么作用? 3、简述实验中应注意那些关键问题? * * 实验六、小鼠骨髓细胞染色体标本制备与观察 秋水仙素,可以抑制细胞分裂时的纺锤体形成,使处于增殖状态的细胞停止在中期。注射到动物活体内,可以收集到较多的中期分裂相的骨髓细胞。 1、动物预处理:取材前3~4小时,腹腔注射0.01%的秋水仙素。 2、取材:处死小白鼠,剥取股骨,暴露骨髓腔,用4~5ml KCl冲洗骨髓腔获得骨髓细胞,定容至6ml。 3、低渗:37度恒温水浴30分钟。 4、预固定:加1mlCarnoy固定液混匀,配平,离心1000rpm/8分钟。 5、固定:弃上清,再加Carnoy 固定液至6ml刻度,悬浮,静置20分钟,离心同上。 6、制片:去上清液,加少量固定液,混匀,滴片, 7、染色:Giemsa染色10分钟 取材:椎脱臼处死小白鼠,剥取股骨。 小白鼠骨骼标本 收集细胞: 暴露骨髓腔, 反复冲洗骨髓腔获得骨髓细胞, 收集到离心管中, 定容至6ml. 滴1~2滴于玻片上,吹气, 在酒精灯火焰过火2~3次, 做记号,凉干,染色 滴片: * * *
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