2011实验4 肠道致病菌的分离鉴定.ppt

实验四肠道致病菌分离鉴定 病原生物学教研室 Content 示教： 主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌的形态、染色性 主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板 主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应 操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定——血清学 (*续) 录像： 厌氧菌 肠道杆菌的分类 肠道杆菌的基本特征 形态结构相似 培养要求不高 生化反应活跃 抗原结构复杂 抵抗力不强 易发生变异 粪便标本肠道致病菌鉴别流程 SS平板—— 分离肠道病原菌的强选择培养基 成分： 基础培养基、乳糖、枸橼酸钠、硫代硫酸钠、枸橼酸铁、胆盐、煌绿、中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） 作用： 乳糖，中性红：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色。 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：抑制肠道非致病菌如E.coli的生长，对肠道致病菌抑制作用弱。可增加标本接种量以提高肠道病原菌分离率。 病原菌:小,无色,透明 非致病菌:大,红色 双糖管 发酵乳糖 H2S试验 发酵葡萄糖(产酸产气)及动力 双糖管接种方法 肥达试验 原理： 肥达试验 操作： 肥达试验结果分析（1） 凝集程度： （＋＋＋＋）上层液澄清，细菌全部凝集于孔底 （＋＋＋）上层液基本透明，细菌大部分（75％）凝集于孔底 （＋＋）上层液半透明，细菌在孔底有明显凝集 （＋）上层液混浊，孔底有少量凝集 （－）不凝集，同于对照 书写报告：＋＋反应的最高稀释度为凝集效价 肥达试验结果分析（2） 凝集效价：伤寒沙门菌O≥ 1：80，H≥ 1：160 副伤寒沙门菌H≥ 1：80 动态观察：双份血清，效价≥ 4倍 O与H抗体的诊断意义：O—IgM, H—IgG O、H抗体均高：肠热症 O、H抗体均低：未患病 O抗体不高，H抗体高：回忆反应，预防接种 O抗体高，H抗体不高：感染早期，交叉反应 上次实验结果观察： 脓汁标本中的两种菌落： 黄色，完全溶血 白色，不溶血 The End Thanks * * 肠杆菌科 志贺菌属 埃希菌属 沙门菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属 ETEC, EIEC, EPEC, EHEC, EAEC 痢疾、福氏、 鲍氏、宋内 伤寒，副伤寒， 猪霍乱，肠炎 标本 鉴别培养基 （SS培养基） 生化反应 （双糖管） 血清学鉴定 SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落) 接种双糖管 培养,观察 EMB平板 病原菌:透明,无色 非致病菌:紫黑色 上层：乳糖,Fe2+ 固体 下层：葡萄糖 半固体 指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红） 致病菌红色 非致病菌黄色 ▼ 观察： 乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶 大肠埃希菌 ＋ + － 痢疾志贺菌 － + － － 伤寒沙门菌 － + + +/－ 副伤寒杆菌 － + + － 变形杆菌 － + + + 红色 黄色 双糖管结果观察 黄色 黄色 可疑肠道致病菌 大肠埃希菌 穿刺—斜面接种法 伤寒沙门菌菌体O 抗原 伤寒沙门菌鞭毛Ｈ抗原 甲型副伤寒沙门菌鞭毛H抗原 肖氏沙门菌鞭毛Ｈ抗原 已知抗原 病人血清中的未知抗体 凝集 病人血清 生理盐水 生理盐水 1:1280 1:640 1:320 1:160 1:80 1:40 1:20 0.2ml 0.2ml 肖氏H 0.2ml 0.2ml 副甲H 0.2ml 0.2ml 伤寒H 0.2ml 0.2ml 伤寒O 8 7 6 5 4 3 2 1 微量板 混匀 Ag加样方向 抗原 接种甘露醇发酵管 革兰染色 观察是否发酵甘露醇