色谱分析实验大纲.docx

气相色谱法分析苯、甲苯、萘混合物一、实验目的1. 气相色谱图的分析。2. 温度对保留时间的影响。3. 保留因子、分离度的计算。4. 标准曲线的建立。二、实验原理基本术语基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。噪音(noise)--基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。保留时间(retention time，tR)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。保留因子：分离度：气相色谱中随着温度升高，目标物保留时间减少，分离度降低。三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；超声波清洗器；色谱柱(C18)；微量注射器(20ul)。试剂：甲醇（A.R.）；苯（A.R.）；甲苯（A.R.）；萘（A.R.）。四、实验步骤1. 色谱条件为气相色谱柱:流动相：氮气进样量：10.0ul进样口：150 oC柱温箱: 80 oC检测器: 250 oC2.溶液配制（1）储备溶液配制：准确称取苯2.000g、甲苯2.000g、萘2.000g分别置于3个100mL容量瓶中，用甲醇溶解后，定容至刻度。（2）标准溶液配制：根据实验需要，准确吸取一定量的储备液，分别配制成苯0.04-1.0 mg/mL、甲苯0.04-1.0 mg/mL、萘0.04-1.0 mg/mL标准溶液.3.基线走稳后，分别注入苯、甲苯、萘的标准溶液10.0uL，记录各物质的色谱峰。记下各组分的死时间、保留时间、峰宽和峰面积。4. 注入待测样品溶液10.0uL，记下各组分的死时间、保留时间、峰宽和峰面积。5. 实验完毕，按要求关好仪器。五、思考题【1】气相色谱中温度对保留时间的影响及原因。【2】计算保留时间、分离度和理论塔板高度。【3】建立标准曲线。液相色谱法分析苯、甲苯、萘混合物一、实验目的1. 气相色谱图的分析。2. 流动相对保留时间的影响。3. 保留因子、分离度的计算。4. 标准曲线的建立。二、实验原理基本术语基线(base line)--经流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。噪音(noise)--基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。漂移(drift)--基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。色谱峰(peak)--组分流经检测器时响应的连续信号产生的曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称形正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。峰高(peak height，h)-峰的最高点至峰底的距离。峰宽（peak width，W)-峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。半峰宽（peak width at half-height，Wh/2)-峰高一半处的峰宽。峰面积(peak area，A)-峰与峰底所包围的面积。死时间(dead time，t0)--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。保留时间(retention time，tR)--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。保留因子：分离度：工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度。反相液相色谱中随着有机相浓度增加，目标物保留时间减少，分离度降低。三、仪器与试剂仪器：高效液相色谱仪；超声波清洗器；色谱柱(C18)；微量注射器(20ul)。试剂：甲醇（A.R.）；苯（A.R.）；甲苯（A.R.）；萘（A.R.）。四、实验步骤1. 色谱条件为色谱柱 C18：4.6mm×150.0mm流动相甲醇：水=70：30，80：20，90：10（超声半小时脱气）进样量：10.0ul检测器UV，波长254nm灵敏