不同耕作方式下土壤有机质与微生物数量的关系不同耕作方式下土壤有机质与微生物数量的关系.doc

不同耕作方式下土壤有机质含量与微生物数量的关系研究 1.2 土壤样品的处理 土壤样品的处理包括风干、去杂、磨细、过筛、混匀、装瓶保存和登记等操作过程。 1.2.1 风干和去杂 从地里采回的土样放在阴凉干燥通风、并无酸蒸汽、氨气和灰尘的污染的室内，把样品弄碎后平铺在干净的报纸上，经常翻动加速风干，风干后拣去植物残枝、石块等杂质。 1.2.2 磨细、过筛和保存 将风干后的土样放在牛皮纸上，用木棍碾碎，使之通过60目筛。筛好后的土样分别装于广口瓶内，附上标签，标明样品名称、编号、采样日期、采样地点、采样人。 2、试验部分 2.1土壤中微生物（细菌、真菌、放线菌）数量的测定 2.1.1 方法提要 土壤微生物数量分析采用稀释涂布平板法，其中采用牛肉膏蛋白胨培养基培养细菌，高氏一号培养基培养放线菌，马铃薯培养基培养真菌。 2.1.2 方法原理 稀释涂布平板法能有效分离纯化微生物外，还可用于测定样品中活菌数量。将微生物细胞充分稀释到单个分散，把这些单个分散的细胞均匀涂布在平皿培养基上，培养后长出的菌落肉眼可见，每个菌落都由原液中单个细胞发育而来，计算菌落数，通过公式可以求出单位原样品中的活菌数。 每ml(g)样品中的活菌数=（每皿菌落数平均值/取样体积）×稀释倍数 土壤是微生物生活的大本营，所含微生物无论是数量还是种类都是极其丰富的，不同土样中各类微生物数量不同，一般土壤中细菌数量最多，其次为放线菌和霉菌及真菌。本实验将采用3种不同的培养基从土壤中分离不同类型的微生物。 2.1.3 实验器材 样品：土壤样品 培养基：1、牛肉膏蛋白胨培养基 2、高氏一号培养基 3、马铃薯培养基 仪器及其他：试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻棒、天平、钥匙、高压蒸汽压力锅、记号笔、涂布棒、培养皿、吸管、无菌水、PH试纸等。 2.1.4 实验过程 培养基的配制 （1）牛肉膏蛋白胨培养基 配方：牛肉膏1.5g，蛋白胨5g,NaCl 2.5g，琼脂条 10g，水500ml，pH 7.2 具体步骤：称量药品→加热溶解→定容→调PH→分装→包扎标记。 （2）高氏一号培养基 配方：可溶性淀粉 10g，KNO3 0.5g，NaCl 0.25g，K2HPO4 0.25g，MgSO4 0.25g，FeSO4 0.005g，琼脂 10g，水500ml，pH 7.2~7.4 具体步骤：称量药品→加热溶解→定容→调PH→分装→包扎标记。 （3）马铃薯培养基 配方：马铃薯100g，蔗糖10g，琼脂10g，水500ml，pH自然 具体步骤：马铃薯去皮，切成块煮沸半小时，然后用纱布过滤，再加糖及琼脂，溶化后补足水至500ml。 将上述培养基放入高压蒸汽压力锅内121°灭菌30min。当培养基冷至50℃左右到平板。将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24～48h，以检查灭菌是否彻底。 制备土壤稀释液 将一瓶土壤菌液（称取土样10g放入盛90ml无菌水）和5管9ml的无菌水排列好，按10-2、10-3、10-4、10-5、10-6依次编号。在无菌操作条件下，用1ml无菌移液管吸取1ml10-1浓度的菌液于一管9ml无菌水中，将移液管吹洗三次，摇匀即为10-2浓度菌液。同样方法，依次稀释到10-5。 涂布平板 用1ml无菌吸管分别精确吸取10-3、10-4、10-5、10-6的稀释菌液1ml，对号放入编好号的3种无菌培养皿中，用无菌涂布棒将加入平板培养基上的土壤稀释液在整个平板表面涂匀，涂完一个平板用酒精灯灭菌。 培养 接种完毕，将接种放线菌和真菌的平皿倒置与28℃培养箱中培养3~5天，培养细菌的平皿倒置于37℃温室中培养1~2天。计数。 实验结果数据处理，得如下表： 表1 不同耕作方式下土壤微生物数量 ×104个/g 土地利用类型 细菌 放线菌 真菌 微生物总量 菜地 157.36 18.13 18.65 194.14 梨地 149.82 14.78 15.31 179.91 竹林 128.17 12.72 13.28 154.17 荒地 107.45 7.75 10.71 125.91 山坡林地 112.24 12.15 12.87 137.26 池塘底泥 185.78 17.69 18.23 221.7 2.1.5 结果与分析（不同耕作方式下土壤中微生物种类和数量的差别） 从上述实验结果数据上看，不同耕作方式下，土壤中三大微生物的组成比例大体上一致但又略有差异。从土壤微生物的种类上看，细菌数量占微生物总数的81%~85%左右，放线菌数量占总量的6.2%~9.4%左右，真菌占总量的8.2%~9.7%左右。可见土壤微生物中细菌最多占绝对的优势。从土壤微生物的总数来看，不同土地耕作方式下微生