免疫细胞的分离技术2011.ppt

T淋巴细胞亚群 T细胞的发育阶段分类 表达TCR的类型分类 是否表达CD4或CD8 T细胞功能分类 辅助性T细胞 Helper T cells , Th 辅助性T细胞 Helper T cells , Th 滤泡辅助性T细胞（T??follicular??helper，Tfh）通过细胞因子IL-10和IL-21来调节B细胞的功能 记忆T细胞(Tm) 效应性记忆T细胞TEM 外周炎症组织 行使速发性效应功能 CD45RO+CCR7-CD62L- 快速，方便 纯度和得率均较低 易引起Mo/M?激活，引起基因表达和分泌蛋白 优点 　 缺点 　 将特异性抗单核细胞表面分子CD14的单克隆抗体免疫磁珠与PBMC混合，用这种免疫磁珠从PBMC中结合单核细胞 在磁场中，结合单核细胞的免疫磁珠固定了，未结合的其它细胞被洗脱下来 撤离磁场，再从免疫磁珠上洗脱 CD14+单核细胞 免疫磁珠法 阳性选择单核细胞 　 将多种特异性抗非单核细胞表面分子的单克隆抗体与磁性小珠形成免疫磁珠，用这种免疫磁珠从PBMC中结合非单核细胞 在磁场中，结合其它细胞的免疫磁珠固定了，未结合的单核细胞被洗脱下来 免疫磁珠法 阴性选择单核细胞 　 　 Monocyte Isolation Kit II Non-monocytes, such as T cells, NK cells, B cells, dendritic cells, and basophils, are indirectly magnetically labeled using a cocktail of biotin-conjugated antibodies against CD3, CD7, CD56, CD19, CD16, CD123, and CD235a (Glycophorin A), as well as Anti-Biotin MicroBeads. Highly pure unlabeled monocytes are obtained by depletion of the magnetically labeled cells. PBMC before separation Untouched Monocytes 免疫磁珠法 阴性选择单核细胞 PBMC用PBS洗涤，低温离心弃上清 加入含AB血清的PBS封闭，4℃孵育10分钟 加入适量的FITC-CD14抗体，4℃孵育30分钟 PBS洗涤，低温离心弃上清并用RPMI 1640重悬 流式细胞术分选 　 流式细胞术分选单核细胞 （四） 自然杀伤细胞（NK）的分离技术 无须抗原预先作用，可直接杀伤肿瘤细胞和病毒感染细胞，在机体免疫监视和早期抗感染过程中起重要作用 NK细胞表面标志 表面标志抗原：CD3-、CD56+ 、CD16+ 　 NK cell Isolation Kit Non-NK cells, i.e., T cells, B cells, stem cells, dendritic cells, monocytes, granulocytes, and erythroid cells, are indirectly magnetically labeled by using a cocktail of biotin-conjugated antibodies and the NK Cell MicroBead Cocktail. Isolation of highly pure NK cells is achieved by depletion of magnetically labeled cells. PBMC before separation Untouched NK cells 免疫磁珠法 三、免疫细胞分离的临床意义 免疫细胞的分化 肿瘤局部微环境内的抑制性细胞亚群 调节性T细胞（regulatory T cells, Treg） 髓系来源的抑制性细胞(myeloid-derived suppressor cells, MDSCs） 肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophages, TAM） 调节性NK细胞（regulatory NK cells） 调节性树突状细胞（ regulatory DC） 中枢性记忆T细胞TCM 外周淋巴器官 分化成效应细胞 CD45RO+CCR7+CD62L+ * * * * * * * * * 玫瑰花结法（E花环沉降法） 尼龙毛柱分离法 淘洗法 免疫磁珠法 流式细胞术分选法 （二）T淋巴细胞及其亚群的分离 人T淋巴细胞表面表达CD2分子，即绵羊红细胞受体， B细胞则无。在适当的条件下，可与绵羊红细胞（SR