微生物限度验证资料.doc

微生物限度检查方法学验证 一、微生物限度检查 照微生物限度检查法（中国药典2010年版二部附录XI J）检查。 1. 菌种 验证试验所用的菌株传代次数均为3代。 大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44 102] 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003] 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501] 白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001] 黑曲霉(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003] 2菌液制备 (1)取经35℃培养18～24h的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的营养肉汤培养物1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。 (2) 取经25℃培养18～24h的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。 (3) 取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3～5ml0.9%无菌氯化钠溶液洗下霉菌孢子，吸出菌液，用标准比浊法比浊，然后取1ml+9ml0.9%无菌氯化钠溶液，逐管10倍稀释至10-4，细菌数约为50～100cfu/ml，做活菌计数备用。 3.供试液制备 取供试品10g，加45℃ pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液100ml，用匀浆仪研匀， 枯草芽孢 杆菌 金黄色 葡萄球菌 大肠埃希菌 白色念珠菌 黑曲霉菌 供试品对照组 回收率 85% 91% 87% 93% 90% 稀释剂对照组回收率 87％ 93％ 85％ 92％ 89％ 培养时间（h） 48 48 48 72 72 方法 薄膜过滤法 常规法 各菌株回收率﹦[（实验组菌数-供试品对照组菌数）÷菌液组菌数]×100% 结论：本品按中国药典2010年版微生物限度检查，经方法学验证试验，结果可用薄膜过滤法进行细菌计数方法检验，用常规法进行霉菌计数方法检验。供试液制备过程中微生物影响:验证试验所用的菌株传代次数均为3代 大肠埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44 102] 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003] 2. 菌液的制备 37℃培养18～24h的大肠埃希菌金黄色葡萄球菌的营养琼脂培养物1白金耳，接种至10ml营养肉汤培养基中，在30～35℃培养～小时后，用0.9%无菌氯化钠溶液稀释至每1ml中含0～100cfu的菌悬液。供试品的制备：取本品10g，加入pH7.0的无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100 ml，用匀浆仪研匀，作为1：10供试液。大肠埃希 4.2阴性对照组 菌种名称 菌种代数 验证加菌数（CFU） 采用方法 试验生长时间（h） 大肠埃希菌 3 78 薄膜过滤法 24 金黄色葡萄球菌 3 78 24 4.3 控制菌结果 验证菌 方法 培养时间 试验组 阴性菌对照组 大肠埃希菌 薄膜过滤法 24h + - 结论：本品经按《中国药典》微生物限度检查法中控制菌检查验证方法验证，结果表明可用薄膜过滤法检验大肠埃希菌。 5．样品检查 取本品三批样品，依法检查（中国药典2010年版一部附录ⅩⅢ C）。结果见表3。 表3 微生物限度检查测定结果 批号20040311 细菌数(个/g) 小于10 小于10 小于10 霉菌数(个/g) 小于10 小于10 小于10 大肠埃希菌 未检出 未检出 未检出 活螨 未检出 未检出 未检出 结果表明，三批样品的微生物限度检查均符合规定。 - 3 -