实验七 薄层色谱补充文档.ppt

8， 操作步骤 ⑴制板（以硅胶板为例）? ???选择合适的玻璃板（经常使用显微镜上的载玻片），依次用水和乙醇洗净，晾干。取适量薄层色谱用的硅胶，加适量蒸馏水调成糊。调制时慢慢搅拌，勿使产生气泡。将糊倒在玻璃板上，摇动摊平，晾干。使用前放入烘箱内，在105-115oC左右烘干40-50分钟。冷却后使用。 ? ? ⑵点样? ? 将试样用最少量展开剂溶解，用毛细管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量过多。 ? ? ⑶展开 ? ? 吹干样点，竖直放入盛有展开剂的有盖展开瓶中。展开剂要接触到吸附剂下沿，但切勿接触到样点。盖上盖子，展开。待展开剂上行到一定高度（由试验确定适当的展开高度），取出薄层板，再画出展开剂的前沿线。 ? ? ⑷显色，计算Rf值? ? 挥发干展开剂，选择合适的显色方法显色。量出展开剂和各组分的移动距离，计算各组分的相对移动值。 9， 注意事项 1、制板时，硅胶用水调成刚好能流动的糊状物为佳，勿太浓或太稀，并即刻铺在层析板上。做好的层析板应均匀一致，否则会影响分离效果。 2、点样量不能太大，否则会导致拖尾至使重点分离不完全。建议在同一层析板上依讲义图9~1点两个样点（同一样品），其中样点1点样最少一些（φ≤1mm），样点2点样量稍大一些，这样，实验的效果化较好。 3、展开剂不要加得太多（1~2ml即可），展开时不要把样点浸入展开剂中。 4、待溶剂前沿离层析板顶端仅1~2mm时方能取出，否则色点分离不完全。但溶剂不能冲顶，否则色点会扩散而影响分离效果。 5、展开结束后，应立即记下溶剂前沿的位置，并把色谱图照原样及时记录在报告本上，注明各点的颜色，并计算各点的Rf值。 6、本实验的色谱图上可出现3~6个色点，在此范围内色点越多，分离效果越好。 7、薄层层析不仅可用来分离有色物质，也可分离无色物质。 8、操作要小心，特别是点样时，不要损坏层析板。 9、实验完毕倒掉展开剂，层析缸不用洗。 10，讨论题 1.做薄层色谱法实验时，为什么展开剂不可浸过样品点？ 根据原理，色谱法需要溶剂与固定相的相对流动，才能够通过不同组分“溶解、吸附平衡”的不同，使它们随溶剂的迁移速率不同（极性小溶解好的迁移快，极性大易于吸附的迁移慢），从而达成分离。 具体到TLC而言，溶剂靠硅胶板“虹吸作用”从溶剂液面起向上流动。这也就是说，被溶剂泡着的那部分板子上，溶剂实际上是同板子相对静止的，没有相对流动也就自然无法达到分离。 当然上面说的都是理想情况。很多时候，你点好的TLC板如果样品Rf值比较大，那在浸入了溶剂中的时候，溶剂就能使样品点扩散成一个扁椭圆并仍与溶剂面持平。而如果Rf值很小，浸没的又比较深，才可能发生我上面所说的只扩散、不分离的情况。有兴趣的话可以在TLC分析时，特地多放些展开剂试一试。 2.影响Rf值的主要因素有哪些?用Rf值为什么能鉴定未知物? Rf value 写做Rf值。主要是纸上层析法的用词。源自流速（rate of flow）。溶剂从原点渗透到距离a（一般在20—30厘米时测定）的时候，如果位于原点的物质从原点向前移动到b，那么b/a的值（0.0—1.0）就是这种物质的Rf值。例如把葡萄糖和果糖在20℃下于正丁醇-醋酸-水（4∶1∶5）中展开，可分别得到0.18、0.23的Rf值，在醋酸乙酯-吡啶- 水（2∶1∶1）中展开，则分别得到0.28、0.32的Rf值。若滤纸、溶剂温度等保持恒定，则各种物质呈现特定的Rf值，成为鉴定物质的极重要的常数。 0 答案 2、薄层色谱法点样应注意些什么？ 将试样用最少量展开剂溶解，用毛细管蘸取试样溶液，在薄层板上点样。在样点上轻轻画出一条平行于玻璃板底边的细线。薄层色谱板载样量有限，勿使点样量过多。 点样量不能太大，否则会导致拖尾至使重点分离不完全。建议在同一层析板上点两个样点（同一样品），其中样点1点样最少一些（φ≤1mm），样点2点样量稍大一些，这样，实验的效果化较好。 点样时点要细，不能戳破薄层板面，直径不要大于2mm,间隔0.5cm以上，浓度不可过大，以免出现拖尾、混杂现象。 Thank you for your attention!Q A 实验七 薄层色谱 药物化学教研室 陈永正 28/10/2010 * 1.硅胶的性质 (硅胶）Silicon dioxide SiO2 硅胶是由美国约翰·霍普金斯大学的 化学教授Walter A. Patrick在1919年发明 的，第一次世界大战时曾被用作 防毒面具中的吸收剂。 硅胶是一种粒状多孔的二氧化硅水合物，由硅酸钠加酸后洗涤干燥制得，主要用作干燥剂以及柱色谱和薄层色谱中的吸附剂。虽名称为“胶”，它实际