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实验七 洋葱皮中总黄酮的分析 一、目的要求 学习热回流提取法提取洋葱皮中黄酮类化合物 掌握分光光度法测定天然产物中总黄酮含量 二、基本原理 黄酮类化合物是指基本母核为2-苯基色原酮的一系列化合物。存在于植物的茎液中。许多黄酮类的化合物都有明确的药理作用。本实验选择以洋葱皮为对象，用分光光度法测定其总黄酮的含量。 黄酮类化合物的结构特点： 本实验利用黄酮类化合物与Al3+生成红色络合物，在500~510nm处测定吸光度，进而确定黄酮类化合物的总量，以芦丁作为对照品绘制标准曲线。根据A=ECL计算含量。 三、仪器与试药 实验仪器 电子天平、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、水泵、紫外-可见分光光度计 容量瓶、移液管、圆底烧瓶、球形冷凝管等 试剂与试样 芦丁标准溶液（0.1944mg/ml）、60%丙酮、5%亚硝酸钠溶液、10%硝酸铝溶液、 0.1mol/L氢氧化钠试液 四、实验步骤 洋葱皮中黄酮类化合物的提取 四、实验步骤 分光光度法测定洋葱皮中总黄酮的含量 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0ml，分别置于50ml量瓶中，各加水至10.0ml，加5%亚硝酸钠溶液2.0ml，混匀后放置6min，加10%硝酸铝溶液2.0ml，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液20.0ml，摇匀放置15min，定容后在510nm处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线 五、实验数据及处理 比色杯误差：比色杯之间的透光存在差异，需先将两只比色杯进行误差矫正，即：两只比色杯都装上空白溶液，插入光路，将其中一只的吸光度调为零，读取另外一只比色杯的吸光度，数据处理时用（ ā－a）来计算。 其中，ā＝ 标准曲线的绘制 标准曲线的绘制 计算公式 标准曲线法 根据A-C曲线:y = 0.4174x+ 0.0083(r=0.9993)计算出总黄酮的质量 样品溶液的浓度： C=m/2.0(mg/ml) 总黄酮质量=浓度×体积=50C(单位：mg or g) 外标一点法 实验报告格式 目的原理 仪器试药（仪器的厂家、型号） 实验步骤 原始数据（原始数据要原始） 数据处理（表格形式） 思考与讨论 思考题 为什么用芦丁作为对照品绘制标准曲线？是否可以用槲皮素或其他黄酮对照品取代？ 为什么要用外标一点法计算含量？ * 分光光度法的基本原理 Lambert-Beer定律 I I0 l 有色均匀溶液 朗伯定律(1760) A=-lg(I/I0)=k1l 比尔定律(1852) A=-lg(I/I0)=k2c A=-lg(I/I0)=Ecl 吸光度 介质厚度(cm) Lambert-Beer定律的意义：当一束平行单色光通过单一均匀的，非散射的吸光物质溶液时，溶液的吸光度与溶液浓度和液层厚度乘积成正比。 精密称取2.0g洋葱皮 合并滤液 转移50ml容量瓶中， 用水定容 提取两次 峰 509.50 0.493 四只 25ml量瓶 空白 样品1 样品2 芦丁对照品 加6.0ml水 加4.0ml水 5%亚硝酸钠溶液1.0ml 10%硝酸铝溶液1.0ml 10.0ml氢氧化钠试液 水定容至刻度 2、3、4项各2.0ml 放置6min 放置6min 放置15min A510 — 含量（%） — 含量（%） 标准曲线法 外标一点法 比色杯误差：a — 浓度C（mg/ml） 平均吸光度ā 0.1944 浓度C（mg/ml） ２ １ 对照品 样品 样品质量（g）： 2.xxxxg — 平均含量（%） — 平均含量（%） 三次平均 1.1664 0.7776 0.5832 0.3888 0.1944 对照品质量 m（mg） 0.496 0.326 0.260 0.171 0.087 吸光度 A 0.1944 对照品溶液 C（mg/ml） 6.0 4.0 3.0 2.0 1.0 标准溶液体积 V（ml）