药物分析讲稿-第十一章 维生素类药物的分析.doc

第十一章 维生素类药物的分析 维生素是维持人体正常代谢功能所必需的生物活性物质。从结构上看，它们并非同属于一类化合物。其中，有些是醇、酚或酯，有些则是醛、胺或酸类，它们各自具有不同的理化性质和生理作用。关于维生素的分类，迄今为止，仍沿用其在油脂中和水中的溶解度不同而分为脂溶性和水溶性两大类。其中，属于脂溶性的有维生素A、D、E和K等；水溶性的有维生素B族、烟酸、泛酸、叶酸及抗坏血酸等。 本类药物的分析方法大多基于其生物特性及理化性质，可分别采用生物、微生物、化学和物理化学的方法进行分析，但目前常用的分析方法是化学和物理化学法。 本章不拟对所有的维生素类药物的分析方法逐一叙述，而只着重介绍维生素A、E、B1和C四种维生素药物的鉴别、检查和含量测定。 第一节 维生素A的分析 维生素A(vitamin A)，通常是指维生素A1(视黄醇，retinol)。维生素Al是一种不饱和脂肪醇，在自然界中，其天然产物主要来源于鲛类无毒海鱼肝脏中提取的脂肪油(即鱼肝油)，其含量高达600000国际单位/克(U/g)，但目前主要采用人工合成方法制取。从鱼肝油中提取的维生素A多为各种酯类的混合物，其中主要为醋酸酯和棕榈酸酯(表ll-1)。 表ll-l天然维生素A的主要组分 《中国药典》收载的维生素A，是人工合成的维生素A醋酸酯结晶加精制植物油制成的油溶液，其制剂有维生素A胶丸、维生素AD胶丸和维生素AD滴剂三个品种。 一、结构与性质 (一)结构 维生素A的结构为具有一个共轭多烯侧链的环己烯，因而具有许多立体异构体。天然维生素A主要是全反式维生素A，尚有多种其它异构体，它们具有相似的化学性质，但各具不同的光谱特性和生物效价(见表)。 维生素A及其异构体性质 此外，鱼肝油中尚含有：去氢维生素A(Dehydroretinol，维生素A2)，其生物效价仅为维生素A1的40％；去水维生素A(Anhydroretinol，维生素A3)，其效价亦低于维生素A1；鲸醇(Kitol)系维生素A醇的二聚体，无生物活性。这些物质也有紫外吸收，并能与显色试剂产生相近颜色。所以，在测定维生素A含量时必须考虑这些干扰因素。 去氢维生素A(A2，Dehydroretmol) （二）性质 维生素A易溶于乙醚、氯仿、异丙醇、环己烷、脂肪和植物油，微溶于乙醇，在水中不溶。中国药典收载的维生素A为合成维生素A醋酸酯结晶的精制植物油溶液。 维生素A能与三氯化锑作用呈色、在紫外光区呈强吸收，可用于鉴别和含量测定。 二、鉴别试验 (一)三氯化锑反应 1、原理 三氯化锑反应又称Carr-Price反应，反应原理是在三氯甲烷中，维生素A与三氯化锑反应显蓝色，渐变为紫红色。反应机理为维生素A和氯化锑(Ⅲ)中存在的亲电试剂氯化高锑(V)作用形成不稳定的蓝色正碳离子。 2、鉴别方法 取维生素A 1滴，加三氯甲烷lOml振摇使溶解，取出2滴，加三氯甲烷2ml与25％三氯化锑的三氯甲烷溶液0.5ml，即显蓝色，渐变成紫红色。 3、注意事项 反应需在无水、无醇条件下进行。因为水可使三氯化锑水解成氯化氧锑(SbOCl)，而乙醇可与正碳离子作用，使正电荷消失。 (二)紫外-可见分光光度法 (三)薄层色谱法 三、含量测定 维生素A及其制剂的含量测定方法，最初采用生物学方法测定其生物活性，因该法操作繁琐费时、准确度与重现性差，后来被三氯化锑比色法所替代；而三氯化锑法的反应专属性差，呈色极不稳定，测定结果受水分和温度的影响较大，目前各国药典均收载紫外-可见分光光度法作为维生素A的含量测定方法。下面主要介绍中国药典收载的紫外-可见分光光度法(三点校正法)，并简要介绍高效液相色谱法。 (一)紫外-可见分光光度法 维生素A在325～328nm波长范围内有最大吸收，可用于含量测定。其最大吸收波长随溶剂的不同而变化，表11-2为维生素A醇及其醋酸酯在不同溶剂中的最大吸收波长、吸收系数和换算因数。 本法快速、准确，测定结果能较正确地反映出维生素A的生物效价。由于维生素A原料中常混有其他物质，如多种异构体、合成中间体、副产物、氧化降解产物；维生素A制剂中含稀释用油。这些杂质在325～328nm波长范围内也有吸收，对维生素A的测定产生干扰。为消除非维生素A产生的无关吸收所带来的误差，应用“三点校正法”测定，即在三个波长处测定吸光度后，在规定的条件下用校正公式进行校正，然后计算。 1、方法原理 三点校正法是在三个波长处测得吸光度，根据校正公式计算吸光度A校正值后，计算含量，因此称为“三点校正法”。方法原理主要基于两点： (1)物质对光的吸收具有加和性，即在供试品的吸收曲线中，各波长处的吸光度是维生素A与无关吸收(杂质吸收)的代数和。 (2