荧光染料.doc

荧光染料简介荧光定义 　　荧光染料会发出荧光，所谓荧光是指物质分子吸收紫外光后发出的可见光荧光以及吸收波长较短的可见光后发出的波长较长的可见光荧光。　　荧光发生机理 　　每个分子具有一系列严格的分立能级，室温下物质分子大部分处于基态，当这些物质在光的照射下吸收光能后，进入新的状态，称为激发态。处于激发态的分子是不稳定的，它可以通过以10-9-10-7秒的极短时间内发射光量子回到基态。这一过程称为荧光发射，也就是发光。　　激发光谱和发射光谱 　　任何发荧光的物质分子都具有两个特征光谱--激发光谱和荧光发射光谱。 　　在测定时，用以激发荧光的吸收光谱，一般称为荧光物质的激发光谱，它是指相对于不同激发波长的辐射所引起物质发射某一波长荧光的光谱。 　　 荧光发射光谱简称为发射光谱，是指某一波长激发光引起物质发射不同波长荧光的光谱。　　荧光效率和荧光强度 　　分子能产生荧光必须具备两个重要的条件，一是物质的分子必须具有吸收一定频率光能的基团--生色团，二是必须具有能产生一定光量子的荧光团。　　 而物质发射荧光的能力用荧光效率表示。荧光效率为荧光团发射荧光的光量子数与生色团吸收的光量子数的比值称。 　　 荧光效率往往小于1。如罗丹明B的乙醇溶液的荧光效率为0.97；荧光素的水溶液的荧光强度为0.65，荧光效率与物质结构有关，还与所处的环境紧密相关。而对于某种荧光物质在特定的环境下它的荧光效率是固定的。 　　在一定范围内，激发光越强，荧光也越强。即荧光强度（发射荧光的光量子数）等于吸收光强度乘以荧光效率。 　　提高荧光强度的根本方法 　　选择适当强度的光源作为荧光物质的激发光源，和选择适合于被检荧光物质选择性吸收的光谱滤光片作为激发滤光片，是提高荧光强度的根本方法。许多染料的最大吸收峰并不是紫外光，而是在400nm-500nm的蓝绿光，所以紫外光不是这些染料的最佳激发光源，可见光才是这些染料的最佳光源。 常用荧光色素波长 ?　　　　名称　　　　　 　　　 最大吸收波长（nm）? 最大发射波长（nm）?　 适用性　吖啶橙（Acridine orange）　　　　?　　405　　　　　　　　585　　　　　　　 中 吖啶黄（Acridine yellow）　?　　　　　455　　　　　　　　620　　　　　　　 好 碘化丙啶（Propidium iodide）?　　　　 488　　　　　　　　620　　　　　　　 中 溴化乙啶（Ethidium bromide）?　　　　 488　　　　　　　　610　　　　　　　 中 光神霉素（Mithramycin）　　?　　　　　457　　　　　　　　570　　　　　　　 好 派若宁Y（Pyronin Y）　　　　?　　　　 488　　　　　　　　580　　　　　　　 好 罗丹明123（Rhodamine 123）　 ?　　　　560　　　　　　　　540-660　　　　　 中 赫斯特33258（Hoechst 33258） ?　　　　338　　　　　　　　505　　　　　　　 差 荧光素（Fluorescein）　　　　?　　　　495　　　　　　　　525　　　　　　　 好 荧光黄（Lucifer yellow）　　 　　?　　428　　　　　　　　544　　　　　　　 好 伊红（Eosin）　　　　　　　　　　　 　525　　　　　　　　546　　　　　　　 中 四甲基罗丹明（Tetramethyl rhodamine） 555　　　?　　　　 580　　　　　　　 中 SYBR Green　　　　　　?　　　　　　 498　　　　　　　　522　　　　　　　 好 SYBR Gold　　　　　　　　?　　　　　　495　　　　　　　　540　　　　　　　 好 SYPRO Orange　　　　　　　?　　　　　 475　　　　　　　　580　　　　　　　好 SYPRO Red　　　　　　　　?　　　　　　545　　　　　　　　635　　　　　　　中 NBD　　　　　　　　　　　?　　　　　　467　　　　　　　　538　　　　　　　 好 GelStar　　　　　　　　　?　　　　　　495　　　　　　　　530　　　　　　　 好 黄色荧光蛋白EYFP　　　　　?　　　　　 515　　　　　　　　530　　　　　　　 好 绿色荧光蛋白EGFP　　　　　?　　　　　 490　　　　　　　　510　　　　　　　 好 蓝色荧光蛋白EBFP　　　　?　　　　　　 380　　　　　　　　440　　　　　　　 差 常用抗体标记荧光染料的特性及其应用 1、FITC异硫氰酸荧光素绿色：激发波长488nm，最大发射波长525nm。1）其标记的抗体