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《药品生物测定技术》汪穗福主编第二节细菌内毒素检查技术　 广州市医药中专学校　　2006年3月 细菌内毒素检查技术 多媒体课件 课件 总 策　划：　　汪穗福课　件　制　作：　汪穗福、苏惠虹录　像　制　作：　　李晓静动　画　制　作：　　白志明练习自测题制作：　　金　丹 第二节　细菌内毒素检查技术 教学目标 教学重点与难点 复习旧课 讲授新课 小结 教学目的 教学目标 （二）思想、素质教育方面： 　1.培养敬业爱业的职业道德与爱国精神，养成认真、负责、严谨、科学的学习和工作态度 2. 懂得分析问题与解决问题的综合能力 教学重点与难点 重点： 1. 鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理 2. 复核试验的操作方法 难点： 1. 复核试验的有关操作 2. 结果计算和判断 复习旧课 １、什么叫限度检查?主要有哪几种? ２、热原具有--、--、--、--等性质,通常可用--、--、--等方法消除。 ３、热原家兔法检查结果判断标准是: 讲授新课 第三节　细菌内毒素检查技术 　　近20多年来发展起来的一门新技术,它系用鲎试剂与细菌内毒素产生凝集反应的机理，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。 测定方法 　《中国药典》规定：供试品检测时，可使用其中任何一种方法进行试验。当测定结果有争议时，除另有规定外，以凝胶法结果为准。 　　本节将详细介绍这两种方法的操作与有关原理。 一、 内毒素与热原的关系 热原（Pylogen）指在临床上能使哺乳类动物产生热原反应的一类物质。 细菌内毒素（EndotoXin）是G?性细菌细胞壁的组成成分产物，当其死亡或菌体裂解时才释放出的一类具有多种生物活性的毒性物质，其化学结构是脂多糖（LPS）。具有耐热性强，能引起机体产生致热反应的特点。 热原与细菌内毒素的关系　即热原是否就是内毒素，在学术上仍有争议。热原不仅是细菌内毒素，但在药检的范畴，细菌内毒素是主要的热原物质，可以说无内毒素就无热原，控制内毒素就是控制热原。 二、发展简况 1 .历史回顾 　　1942年《美国药典》首先收载兔法检测热原。 1956年,美国Bang发现鲎注入G-菌引起血凝。 1968年，美国Liven与Bang创立了鲎试验方法 1973年，美国提取变形细胞溶解物制成鲎试剂，创造了检测微量内毒素的检测技术。 1980年美国药典20版收载了《细菌内毒素检查方法》，但未在任何品种要求进行该项检查。 1984年USP(第4增补本)，修定了《细菌内毒素检查方法》，规定了40种放射性药品和5种注射用水以细菌内毒素检查法代替热原检查法。 1991年USP22版第5增补版公布了185种药品用细菌内毒素检查。第23版则达471多种, 到1999年24版高达670余种,而用家兔热原检查仅有20多种。 2000年国际调和委员会使美国药典（USP）、欧洲药典（EP）和日本药局方（JP）达成《BET的国际调和案》，统一的BET已收栽于USPXXⅣ版NF19的第二增补本中，并于2001年1月1日生效。随后USPXXⅤ、USPXXⅥ、USPXXⅤⅡ均正式收栽。 1987年欧洲药典收载了《细菌内毒素检查方法》，1998年收载品种已达100多种。 1989年英国药典（JP）收载了该法，到1997年有40余种用该法检查，2000版收载了147种。 1991年日本药局方也收载了该法，14药局方也超过200多种。 2.我国的研究应用概况： 　1978年我国药检系统开始研究鲎试验法。 1983年，开始组织了鲎试验标准化的研究，确立了生物活性效价单位(内毒素单位EU)表示的我国内毒素参考标准品；确定了以此标准品10 EU/Kg为静脉注射药品的致热阈值(K)。 1988年药典委员会指导制定了《细菌内毒素检查法》和鲎试剂标准，作为4种剂型注射液热原检查初试方法，10月在全国试行。 1991年9月转为正式部标准。1995年版中国药典收载，规定细菌内素检查品种13个。 2000年版《中国药典》 （二部）做了修订，收载了《细菌内素检查法应用原则》，检查品种69种。《中国药典》(2005年版)再次做了重大修订, （一部）（二部）（三部）均收载了《细菌内素检查法》，增修订检查品种达112种，其中（二部）就收载检查品种186种；（三部）收载检查品种19种。 三、发展趋势与特点 1．国家药典收载成为发展的必然趋势 2．内毒素检查法取代热原检查成为必然的方法 3．走向统一的细菌内毒素检查法 USP、EP和JP自2001年实现了统一。 4. 应用的