第4章： 发酵工业无菌技术.ppt

为比较各种表面消毒剂的相对杀菌强度，常采用在临床上最早使用的消毒剂——石炭酸作为比较的标准，并提出了石炭酸系数这一指标。 所谓石炭酸系数，指在一定时间内被试药剂能杀死全部供试菌的最高稀释度与达到同效的石炭酸的最高稀释度的比率。一般规定处理时间为10分钟，而供试菌定为Salmonellatyphi（伤寒沙门氏菌）。 消 毒 试 验 ⑴ 以人工染菌实物为消毒对象，模拟现场表面污染大肠杆菌液。 ⑵ 消毒前采样：放置无菌规格板，取无菌棉拭于含5ml稀释液试管中沾湿，在规格板空心处旋转自左至右涂抹整个区域。 ⑶ 消毒后采样：在前采样地点旁用0.05％过氧乙酸溶液消毒物体表面，30分钟后将无菌棉拭于含5ml采样液试管中沾湿，作为消毒后样液。 ⑷ 将消毒前后样液充分振荡摇匀后稀释。 ⑸ 培养待凝固后37℃培养24～48小时，作菌落计数。 灭菌效果监测 １、高压蒸气灭菌效果监测 (1) 高压蒸气灭菌指示卡：将卡片放入灭菌器不同部位，观察灭菌后指示卡颜色变化。 (2)芽胞菌片法：将每片染有嗜热脂肪杆菌芽胞105cfu/ml的菌片包好、放入灭菌器内。灭菌后作细菌计数测定。对照是不经灭菌的菌片，芽胞完全被杀灭或杀来率达99.9999％为合格。 ２、紫外线消毒效果监测 （1）微型紫外线强度计：使用时打开仪器开关，装入电池，打开电源开关，接通电源，将测定电压转换开关拨至电压一方，此时指针应超过中线。 测定时，将测定电压转换开关拨至测定一方，打开紫外线灯照射２分钟后，将紫外线灯强度计置于紫外线灯下垂直１Ｍ的中央进行照射，直至仪表指针稳定，所示之值即为该紫外线灯的强度值(uw/cm2) 。 （2）紫外线强度与消毒剂量指示卡： 测定灯管强度时，将卡片置于离紫外灯管１Ｍ的中央处，将图案一面朝向灯管，照射一分钟（照射时间要准确）后，图案正中涂层由白色变为紫红色。与周围相应色块相比，可测知所照射的强度。 新灯管以不低于100uw/cm2为合格，旧灯管低于70uw/cm2应更换。 空气的净化 一、空气中微生物的分布 空气中微生物的含量和种类，随地区，季节和空气中灰尘粒子多少，以及人们的活动情况而异。 北方气候干燥，寒冷，空气中的含菌量较多，离地面越高，含菌量越少；一般每升高10米，空气中的含菌量就降低一个数量级； 城市的空气中含菌量较多，农村的空气中含菌量较少，一般城市空气中杂菌数为3000～8000个／米3 。 空气中的微生物种类以细菌和细菌芽胞较多，也有酵母，霉菌和病毒。 这些微生物大小不一，一般附着在空气中的灰尘上或雾滴上，空气中微生物的含量一般为103～104个/米3。 灰尘粒子的平均大小约0.6μm左右，所以空气除菌主要是去除空气中的微粒（0.6-1μm） 二、空气除菌 工业发酵对空气处理的要求随发酵产品和菌种不同而异。 半固体制曲和酵母生产中无菌要求不十分严格，一般无需复杂的空气净化处理； 密闭的深层通气发酵需严格的纯净培养，进入发酵罐前空气必须进行冷却、脱水、脱油和过滤除菌等处理。 （二）发酵对空气无菌程度的要求 好气性发酵过程中需要大量的无菌空气，空气要做到 绝对无菌在目前是不可能的，也是不经济的。 发酵对无菌空气的要求是：无菌，无灰尘，无杂质，无水，无油，正压等几项指标。 发酵对无菌空气的无菌程度要求是：只要在发酵过程中不因无菌空气染菌，而造成损失即可。 在工程设计中一般要求1000次使用周期中只允许有一个菌通过，即经过滤后空气的无菌程度为N=10-3。 我国GMP把药厂洁净度分为四级： 洁净区：100级，10000级 控制区：100000级，300000级。 控制区：人员均须更衣后经缓冲室才能进入 洁净区：人员应经淋浴、更衣、风淋后才能进入 细菌的热力致死时间随致死温度而异。它表示了不同热力致死温度时细菌芽孢的相对耐热性。 与热力致死速率曲线一样，若以热处理温度为横坐标，以热处理时间为纵坐标（对数值），就得到一条直线，即热力。 表明热力致死规律同样按指数递降进行。 Z值的概念：直线横过一个对数循环所需要改变的温度数（℃）。 换句话说：Z值为热力致死时间按照1/10，或10倍变化时相应的加热温度变化（℃）。 Z值越大，因温度上升而取得的杀菌效果就越小。 通常用121℃（国外用250F°或121.1℃）作为标准温度，该温度下的热力致死时间用符号F来表示，并称为F值。 F值的定义就是在121.1℃温度条件下杀死一定浓度的细菌所需要的时间——F值与原始菌数是相关的。 若T2=121.1℃，则t2=F 除菌的方法 培养基的加热灭菌（包括常压或蒸汽