去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析.pdf

感染 、炎症 、修复 2010年3月第 11卷 第 1期 ·17 · · 论 著 · 去分化来源表皮干细胞与在体表皮干细胞之间的差异分析 孙晓艳 付 小兵 刘惠玲 (解放军总医院基础医学研究所 ，北京 100853) 【摘要】 目的：比较去分化来源的表皮于细胞与在体表皮干细胞之间的异 同点。方法：采用碱性成纤维细胞诱 导因子(bFGF)诱导表皮细胞去分化形成表皮干细胞；由人包皮分离、培养在体表皮干细胞。采用免疫细胞化学染 色法、流式细胞检测技术、细胞染色体核型检测技术及逆转录一聚合酶链式反应法 (RT-PCR)观察去分化来源的表皮 干细胞与在体表皮干细胞之间细胞表面标志蛋 白表达 、细胞亚群及染色体核型等方面 的差异。结果：免疫细胞化学 染色结果表明，去分化来源的表皮干细胞能够表达表皮干细胞及其亚群特异性的表面标志蛋 白，如 融整合素、角蛋 白19(CK19)、CK14等，而CKlO的表达为阴性。流式细胞技术检测结果显示去分化来源的表皮干细胞及在体表皮 干细胞中 ％叶。CD71一、q CD71及 CD71表达 阳性 的细胞亚群分别 占被检测细胞总数 的 22．8 、68．14 、0及 45．39 、33．110／0、0．02 细胞染色体核型检测分析结果显示去分化来源 的表皮干细胞与在体表皮干细胞 的染色 体均为 23对 、46条 ，核型正常 。此外，RT-PCR检测结果表明去分化来源 的表皮干细胞与在体表皮干细胞 中融整合 素、CK19、CK14及 CK10的mRNA表达水平差异无显著性 。结论 ：去分化来源的表皮干细胞和在体表皮干细胞之 间存在着细胞亚群的分布差异，提示其具有更强的增殖能力；二者在细胞核型和表面标志蛋 白表达等方面具有相似 性 。去分化来源的表皮干细胞可以作为表皮干细胞的替代细胞应用于皮肤重建与再生的相关研究。 关键词 表皮干细胞 去分化 免疫细胞化学 流式细胞检测 RT—PCR Comparisonbetween indigenousepithelialstem cellsandinducedepidermalstem celsl bydedifferentiationofepithelialcells SunXiaoyan，FuXiaobing，LiuHuiling．InsitituteofBasicM edicalScience，ChinesePIA GeneralHospital， Beijing100853，China Corresp0ndingauthor：FuXiaobing(E-mail：fuxb@cgw．net．cn) Abstract0bjective：Toinvestigatethedifferencebetweenindigenousepithelialstem cellsandthoseinduced from dedifferentiationofepithelia1cellswithbasicfibroblastgrowthfactor (bFGF)，andlookforapossibilityto usededifferentiatedinducedepiderma1stem cells(iESCs)inwoundrepairandregenerationofskintissues．Meth- ods：Humanepidermalkeratinocytes (HEKs)werecultivatedand inducedtOreversetheirdifferentiated process andproduceimmature，stem-likecells(dedifferentiationinducedepidermalstem ceils，iESCs)bybFGF invitro． Indigenousepidermalstem cells(ESCs)wereisolatedfrom hum