肺癌开题报告.ppt

黄芪对肺癌小鼠模型的干预机制研究 导师:孙广仁教授 学生： 选题依据 选题目的： 通过建立小鼠肺癌模型，探讨黄芪对肺癌的抑制和转移的作用机制，以期在临床上能有效的运用黄芪对肺癌治疗提供实验依据。建立肺癌小鼠肺模型，观察黄芪对小鼠生存时间，小鼠瘤组织的重量及抑瘤率、小鼠肺转移灶的影响。采用免疫组化方法，观察黄芪对小鼠肿瘤坏死因子及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化。从微观机制研究黄芪对小鼠肺癌的作用机制，为临床防治提供实验依据。 选题意义 根据中国卫生部肿瘤防治办公室提供的2006年中国肿瘤发病率和十大恶性肿瘤发病率排序显示，肺癌居男性恶性肿瘤发病首位，男女恶性肿瘤死亡率最高的均为肺癌[2]。2000年世界卫生组织的统计资料表明，每年全球的肺癌新发病例位1.2百万，占全部恶性肿瘤的12.3％，死亡1.1百万，占肿瘤全部死因的17.8％。更为严重的是，凡是烟草消费大国，其肺癌新发病率乃在不断增长，成为越来越严重的危害人民生命和健康的常见疾病[3]。原发性肺癌是发达国家的主要肿瘤，以美国为例，1997年全美国肺癌的发生数男性为98300例，女性为79800例，分别是男女肿瘤发病率第二位。1997年因肺癌死亡的人数为160400人，居恶性肿瘤死亡率第1位，占全美国肿瘤死亡病人的29％[4]。 中医药在治疗肺癌上有其自己的优势，近几年来应用辨证论治、专方、专药及新药新剂型等方法治疗肺癌均有一定的进展，在稳定病灶、改善症状、提高生存质量、延长生存期等方面都具有一定的疗效和优势。因此研究中医药在肺癌治疗中的作用有其很高的应用价值，能更好的服务于临床中肺癌的治疗。　 肺癌属“肺积”、“息责”等范畴，属于祖国医学“咳嗽”、“咯血”、“肺积”，这与肺癌的临床表现有相似之处。中医学认为，肺癌是由于人体正气不足，尤其是肺脾肾虚损，再加上六淫和七情等因素长期作用，导致肺气不足，肺阴亏虚，升降失调，气血瘀滞，内结于肺，形成积块而发生的[6]。 本研究主要是在建立小鼠肺癌模型，并在此基础上用黄芪对该病进行治疗，通过观察小鼠的一般情况，小鼠瘤组织的重量及抑瘤率、小鼠肺转移灶的影响。采用免疫组化方法，观察黄芪对荷瘤小鼠肿瘤坏死因子及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的变化。从微观机制研究黄芪对小鼠肺癌的作用机制。预期成果不仅可为防治该病证提供新思路和理论依据，指导临床对肺癌的预防、治疗和康复，同时为的深层次机制和研究中药微观作用机制的研究进行资料积累，提供新思路和理论支撑。 课题设计 研究内容与研究方法： 以小鼠转移肺癌模型为研究对象，采用中西药对比进行治疗，动态观察小鼠的体重改变、抑瘤率的比较、肺组织内基质金属蛋白酶MMP-9肿瘤坏死因子TNF-α等细胞因子的变化，从细胞分子水平阐释这些变化，及黄芪和紫杉醇对肺癌的作用的相关性，观察探讨黄芪对肺癌的干预作用的动态变化及时效性，为防治肺癌提供新思路和理论依据。 技术路线 动物实验 1.肺癌的临床诊断：肺癌的临床诊断必须依据临床表现和各种影像结果进行综合分析，但最后的确诊必须取得细胞学或病理组织学的证据。任何没有病理学或病理组织学证据的诊断，都不能为最后的诊断结果。依据这样的原则，肺癌的诊断可分为肺癌的定位诊断和肺癌的定性诊断两种，所有的影像学诊断法方可认为是定位诊断，而所有以获取细胞学或病理组织学为目的的诊断科认为是定性诊断。定位诊断是基础，定性诊断是关键。 2. 肺癌模型建立的方法 （1）肺癌小鼠造模：在本院三级动物实验室中，无菌操作，取肺癌瘤小鼠腹水，稀释至含瘤细胞 2 ×1010 /L，置冰上，每小鼠右腋皮下接种 0. 2ml，分别给模型组、中药组和西药组接种。接种次日24h后进行药物抑药瘤试验；实验设空白组和模型对照组，中药组和西药组。模型对照组中，每只小鼠腹腔注射等体积生理盐水，中药组中每只小鼠腹灌胃 0.4ml，100mg/ml。西药对照组中。每只小鼠腹腔注射紫杉醇注射液0.2ml，20mg/ml 。每只小鼠每天用药 1 次，连续用药 15天，停药次日处死小鼠，剥离肿瘤，称体重及瘤重，计算抑瘤率。 （2）药物干预阶段 造模24h后，空白组、肺癌模型组小鼠不予药物干预，以生理盐水灌胃。中药治疗组小鼠黄芪煎汤灌胃。 药物制备：黄芪25g加8倍水，浸泡半小时，头次煎煮半小时，滤出药渣后加水至药面以上3ml，再煎20分钟。将两次药液混合、过滤，加压浓缩至100%（即每毫升含生药1.0g）的水提剂。 用药方法：将药物按成人日服量换算，计算出小鼠日服量，每日对治疗组小鼠灌服中药煎剂0.4ml/100g体重，对空白组及肺癌模型组小鼠灌服生理盐水0.4ml/100g体重。 连续用药15天，第16天处理所有小鼠。后脱颈处死小鼠,完整剖取接种的瘤块,电子天平称重，按公式:抑瘤率=(空白组平均瘤重-给药组平