流式细胞检测细胞凋亡.ppt

李彩霞 Caixia_li@ * Red = covered in this course. * 当凋亡激活时，caspases一起水解多种蛋白底物，从而使细胞结构和功能缺失，最终导致细胞死亡。尤其是caspase-8、-9和-3都与凋亡有关：Caspase-9在线粒体通路上，Caspase-8在Fas/CD95通路上，Caspase-3位于下游，由多条通路激活。 * 病理情况会引起细胞异常凋亡，如Alzheimer氏综合症、Hodgkin氏综合症、移植物抗宿主性疾病、移植排斥、自身免疫性疾病、肿瘤、AIDS等。 研究细胞生命活动的完整解决方案  --细胞凋亡 BD公司 李彩霞 Caixia_li@ 一个细胞的全面研究 BD 提供的技术方法 Flow Cytometry (FCM) Immunophenotyping Cytometric Bead Array (CBA System for multiplexed Immunoassays) Phosflow (cell signaling) ELISA (BD OptEIA?) ELISPOT Cell Separation (BD Imag?) Western Blots (WB) Immuno-Precipitation (IP) Immuno-HistoChemistry (IHC) Immuno-Fluorescence (IF) … direct link with BioImaging Function Assays (FA) Molecular Biology (MB) Protein Expression (BD Baculovirus Expression Vector) mRNA Detection (BD RiboQuant?) Life and Death of the Cell 外在因素 内在因素 分裂-细胞增殖 分化 维持现状 坏死 凋亡 细胞凋亡概述 细胞凋亡是指为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡。 细胞凋亡参与正常组织发育和自稳态过程。 病理状态: 癌症 (正常的凋亡发生改变/下降） 神经退行性疾病如帕金森氏病和Alzheimer’s 疾病 病毒性疾病如 HIV 自身免疫性疾病如类风湿性关节炎 细胞凋亡研究方法 研究方法: 流式细胞仪 酶联方法 图像 组织化学 基于DNA的方法 BD Pharmingen 有500多种研究凋亡的试剂: 抗体（针对凋亡蛋白） 试剂盒 抑制剂 细胞凋亡研究指标 DNA Fragmentation Caspase Activation Mitochondrial Changes Phosphatidyl-serine Exposure 细胞凋亡研究指标 凋亡相关细胞膜变化的检测 凋亡相关酶活性的检测 凋亡相关线粒体变化的检测 凋亡相关DNA片段的检测 Annexin V 检测-细胞膜变化相关检测 表面 marker 检测细胞膜的变化，与凋亡正相关 早期、快速确定凋亡的方法 需要用活的、没有固定的细胞 方法 流式细胞术 免疫荧光技术 Annexin V 检测原理 Annexin V Data BD Annexin V 流式试剂盒 Kit Cat. No. Annexin V:FITC Apoptosis Detection Kit I 556547 Annexin V:FITC Apoptosis Detection Kit II-Contains unlabeled recomb. Annexin V 556570 Annexin V:PE Apoptosis Detection Kit I 559763 提供FITC, PE, APC,CY5,CY5.5, BD Horizon V450, BD Horizon V500等多种荧光标记的Annexin V以及纯净的Annexin V。 Annexin V检测常见问题 是否 Annexin V kits 可以检测小鼠或其他物种? Annexin V试剂盒可以检测多种属 这个试剂盒是否可用于贴壁细胞、固定或冻存的细胞、或组织? No. 上述样本的细胞细胞膜都会或多或少受到损害，这样的样本建议用免疫荧光技术 (Cat. No. 550911) 是否与细胞表面标记兼容? 只要Ca离子不影响该表面Marker就可以同时做. 凋亡相关酶的检测-Caspase概述 凋亡蛋白酶是凋亡重要的起始因子。凋亡最早和最常检测到的特征之一是一系列名为caspases的胞浆蛋白酶的激活。尤其是caspase-8、-9