转基因玉米的多重pcr2毛细管电泳2激光诱导荧光检测方法研究.pdfVIP

Vo l. 28 高 等 学 校 化 学 学 报 No. 8 2 0 0 7 年 8 月 　　　　　CHEM ICAL JOURNAL OF CH IN ESE UN IV ER SITIES　　　　　 　 1458 ～1463 　 转基因玉米的多重 PCR毛细管电泳 激光 诱导荧光检测方法研究 周 　颖 , 黎源倩 , 裴晓方 (四川大学华西公共卫生学院 , 成都 6 1004 1) 摘要 　采用三重 PCR 反应 , 同时扩增 CaMV 35 S启动子 、h sp70 in tron 1 和 Cry IA ( b ) 基 因之 间序列 以及 Invertase基因 , 扩增产物用无胶筛分毛细管电泳 激光诱导荧光检测 , 从而建立了多重 PCR 毛细管电泳 激光 诱导荧光快速检测转基因玉米的新方法. 对影响多重 PCR 扩增和毛细管电泳的因素进行了优化. 在优化的 条件下 , 本方法可以同时检测转基因玉米样品中 3种外源基因. 经序列测试证实 , 三重 PCR 扩增产物的序 列与原基因完全一致 , 表明扩增结果可靠. 该方法能检出 005% MON 810 转基因玉米成分 , 远低于欧盟对 ( ) 转基因食品规定标识的质量分数阈值 1% . 该方法对玉米及其制品的检测结果与实时荧光 PCR 方法的检 测结果一致 , 与传统的琼脂糖凝胶电泳法相比, 具有特异性高 、快速及灵敏等优点 , 适用于玉米中转基因成 分以及转基因玉米 MON 810 品系的快速筛选 、鉴定和检测 , 能满足我国实施转基因食品标签法规的要求. 关键词 　多重 PCR; 无胶筛分毛细管电泳 ; 激光诱导荧光检测 ; 转基因玉米 中图分类号 　 O657　　　　文献标识码 　A 　　　　文章编号 (2007) 目前 , 检测转基因食品的检测方法主要有两类 : 一类是检测外源基因表达的蛋白质的酶联免疫法 ( EL ISA ) , 该法快速且成本低 , 但难于检测出加工食品中的转基因成分 [ 1 ] . 另一类是 目前应用得较多 ( ) 的聚合酶链反应 Po lym era se chain reaction , PCR 技术 , 该法比 EL ISA 法灵敏 , 主要用于检测转基因食 品中的外源基因序列. 与单重 PCR 相比, 多重 PCR 一次反应就能实现多个基因的同时扩增 , 可以提高 检测效率 , 缩短分析时间和减少受污染的机会 , 实现转基因食品的快速检测. 为了标识转基因食品 , 通常不仅要筛选和检测出转基因作物的 35 S启动子及 NO S终止子 , 还要鉴 定转基因农作物的品系和定量转基因成分. 目前所用的定量竞争性 PCR 及巢式 PCR 等方法均采用传 统的凝胶电泳法 , 该方法耗时且操作繁琐. 毛细管电泳法是近年来发展迅速的分离分析技术之一 , 比 凝胶电泳的分离效能高 、分析速度快 、样品用量少且成本低 , 在 DNA 限制性片段的分析方面具有显著 的优势. 本文以转基因玉米 MON 810 为研究对象 , 采用多重 PCR 技术 , 一次 PCR 反应同时扩增玉米的内 ( ) ( ) 源基因 Inverta se、CaMV 35 S启动子及外源基因玉米热激蛋白 70 内显子 h sp 70 in tron 1 和 Cry IA b 抗