米曲霉谷氨酰胺合成酶基因-上海农业科学院知识竞赛系统.pdfVIP

上海农业学报　２０１５，３１（１）：１７－２２ ＡｃｔａＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｅＳｈａｎｇｈａｉ ＤＯＩ：１０．１５９５５?ｊ．ｉｓｓｎ１０００３９２４．２０１５．０１．０４ 文章编号：１０００３９２４（２０１５）０１０１７０６ 米曲霉谷氨酰胺合成酶基因（ＡｏｇｌｎＡＩ）在大肠杆菌中的 表达和酶学特性研究 １ ２ ２ ３ ３ ３ ３ 杨　君 ，王　航 ，薛　微 ，赵　伟 ，田永生 ，彭日荷 ，姚泉洪 １ ２ （南京农业大学园艺学院，南京２１００９５；上海海洋大学水产与生命学院，上海２０１３０６； ３上海市农业科学院生物技术研究所，上海２０１１０６） 摘　要：将人工合成的米曲霉谷氨酰胺合成酶基因（ＡｏｇｌｎＡＩ）在大肠杆菌中表达，通过谷氨酰胺营养缺陷型 菌株功能基因互补进行了试验，并利用亲和层析法对重组酶进行纯化。结果表明：重组酶分子质量为４０．１ｋＤ， 酶的最适反应温度为３０℃，最适 ｐＨ为７．０。重组酶对底物谷氨酸钠、氨、ＡＴＰ的Ｋ值分别为９．１０ｍｍｏｌ?Ｌ、 ｍ ２０５ｍｍｏｌ?Ｌ、２．４９ｍｍｏｌ?Ｌ。重组酶的酶学特性与非重组酶有一定的差异。 关键词：谷氨酰胺；蛋白表达；蛋白纯化；酶活性 ＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅ ｇｌｕｔａｍｉｎｅｉｎＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ １ ２ ２ ３ ３ ３ ３ ＹＡＮＧＪｕｎ，ＷＡＮＧＨａｎｇ，ＸＵＥＷｅｉ，ＺＨＡＯＷｅｉ，ＴＩＡＮＹｏｎｇｓｈｅｎｇ，ＰＥＮＧＲｉｈｅ ，ＹＡＯＱｕａｎｈｏｎｇ １ ２ （ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＨｏｒｔｉｃｕｌｔｕｒｅ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ２０１１９５，Ｃｈｉｎａ；ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｉｓｈｅｒｉｅｓａｎｄＬｉｆｅ ３ Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｇｈａｉＯｃｅａｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１３０６，Ｃｈｉｎａ；ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＳｈａｎｇｈａｉ ＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｈａｎｇｈａｉ２０１１０６，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅｓｙｎｔｈｅｔｉｃｇｌｕｔａｍｉｎｅｓｙｎｔｈｅｔａｓｅｇｅｎｅ（ＡｏｇｌｎＡＩ）ｏｆＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｏｒｙｚａｅｗａｓｅｘｐｒｅｓｓｅｄｉｎＥｓｃｈｅ ｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ａｎｄｉｔｗａｓｖｅｒｉｆｉｅｄｂｙｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｇｅｎｅｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｇｌｕｔａｍｉｎｅａｕｘｏｔｒｏｐｈｉｃｓｔｒａｉｎ．Ｔｈｅｒｅｃｏｍｂｉ ｎａｎｔｅｎｚｙｍｅｗａｓｐｕｒｉｆｉｅｄｂｙａｆｆｉｎｉｔｙｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ ｅｎｚｙｍｅｗａｓ４０．１ｋＤ．Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅ’ｓｏｐｔｉｍａｌｒｅａｃｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅｗａｓ３０℃，ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｐＨｗａｓ７．０．ＴｈｅＫ ｏｆ ｍ ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｅｎｚｙｍｅｔｏｔｈｅｓｕｂｓｔｒ