白藜三醇促进缺氧条件下人脐静脉内皮细胞的血管生成-中国循环杂志.pdfVIP

622 中国循环杂志 2013 年 12 月 第 28 卷 第 8 期（总第 186 期）Chinese Circulation Journal，December，2013，Vol. 28 No.8（Serial No.186） · · 基础与实验研究 白藜三醇促进缺氧条件下人脐静脉内皮细胞的血管生成作用 * 杨雪，王志荣，张卓琦，张超群，徐晤，程明月 摘要 目的：探讨白藜三醇（Res）对氯化钴（CoCl ）诱导缺氧的人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的血管生成作用的影响及可 2 能机制 。 方法： 体外培养 HUVEC 分 5 组：DMEM 高糖（4500 mg/L）培养基培养细胞组（正常组 ）、CoCl2+DMEM 高糖培养 基（缺氧组 ）、缺氧 +LY294002（阻断剂组 ）、缺氧 + 白藜三醇（药物组 ）、缺氧 + 白藜三醇 +LY294002（药物阻断剂组 ）。 采用 CCK-8 法检测细胞增殖情况；采用蛋白免疫印迹（Western blot）法检测低氧诱导因子 1α（HIF-1α）、血管内皮 生长因子（VEGF）、蛋白激酶 B（Akt）、磷酸化蛋白激酶 B（p-Akt）的表达；免疫细胞化学的方法检测 HIF-1α 的蛋 白表达；采用 transwell chamber（迁移小室 ）检测内皮细胞的迁移能力；体外血管形成实验检测内皮细胞的体外血管 形成能力。 结果： ① CCK-8：缺氧组及药物组 (0.1、1、5、10 μmol/L) 与正常组相比 A490 值升高（P 均 0.01）；药物组（1、 5 μmol/L）与缺氧组比 A490 值升高（P 均 0.01）。尤其药物组 5 μmol/L A490 值明显升高（P 0.01）。②蛋白免疫印迹： 缺氧组较正常组 HIF-1α、VEGF、p-Akt 蛋白表达均增加（P 均 0.05）；药物组（5 μmol/L）与缺氧组相比 HIF-1α、 VEGF、p-Akt 蛋白表达均增加（P 均 0.01）；药物阻断剂组（5 μmol/L）较阻断剂组 HIF-1α、VEGF、p-Akt 蛋白表 达比较差异均无统计学意义（P 均 0.05）。③免疫细胞化学：缺氧组胞内 HIF-1α 阳性表达，显色呈黄褐色； 药物组（5 μmol/L）胞内 HIF-1α 强阳性表达，显色呈深黄褐色。④ transwell chamber：药物组（5 μmol/L）内皮细胞迁移率大于缺 氧组（P 0.01）。⑤体外血管形成实验：药物组（5 μmol/L）在体外的血管形成数量明显大于缺氧组（P 0.01）。 结论：白藜三醇可能是激活磷脂酰肌醇 3- 激酶（phosphatidylinositol 3-kinase，PI-3K）/Akt 通路促进 HIF-1α 聚集，从而促进血管的新生。 关键词 白藜三醇；低氧诱导因子；血管内皮生长因子；蛋白激酶 B；血管生成 Effect of Resveratrol for Improving Angiogenesis in Human Umbilical Vein Endothelial Cell at Hypoxia Condition in vitro YANG Xue, WANG Zhi-rong, ZHANG Zhuo-qi, ZHANG Chao-qun, XU Wu, CHENG Ming-yue. Department of Cardiology, Affiliated Hospital of Xuzhou Medical College, Xuzhou (221002), Jiangsu, China Corresponding Author: WANG Zhi-rong, Email: xzzrw@163.com Abstract Object