冬凌草甲素诱导小鼠肝癌细胞醌还原酶活性及其机理研究.pdfVIP

※营养卫生 食品科学 2017, Vol.38, No.07 193 冬凌草甲素诱导小鼠肝癌细胞醌还原酶活性 及其机理研究 * * 王 佐，王 璐，陈忠正 ，劳 扬，刘杏宜，高 雄，燕 妮，林晓蓉，张媛媛，李 斌 （华南农业大学食品学院，广东 广州 510642） 摘  要：为筛选鉴定出溪黄草中抗癌活性组分，本研究以溪黄草为材料得到乙酸乙酯提取物，通过硅胶柱层析、 半制备色谱分离纯化，利用小鼠肝癌细胞Hepa1c1c7体外模型测定分离产物对细胞存活率和醌还原酶（quinone / reductase，QR NAD(P)H: reductase 1，NQO1）诱导活性。通过核磁共振、质谱分析鉴定组分结构；采用细胞外信 号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase，ERK）、磷脂酰肌醇-3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase， PI3K）、丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinases，MAPK）p38、蛋白激酶C（protein kinase C， PKC）和c-Jun N-末端激酶（c-Jun N-terminal kinase，JNK）5 种蛋白激酶的特异性抑制剂，确定冬凌草甲素诱导 QR活性的信号转导通路，采用实时聚合酶链式反应（real-time polymerase chain reaction，real-time PCR）和Western blot法分别检测NQO1的mRNA和蛋白表达情况。结果： 1）从溪黄草中筛选鉴定出一较强诱导QR活性组分为冬凌草 甲素；2）冬凌草甲素质量浓度为0.94 μg/mL时，即可诱导QR活性倍增；3）PI3K抑制剂处理显著抑制冬凌草甲素 诱导的QR活性，而ERK抑制剂处理显著促进冬凌草甲素诱导的QR活性，但PKC、p38和JNK抑制剂处理对冬凌草 甲素诱导的QR活性无明显影响；4）冬凌草甲素显著提高细胞内NQO1的mRNA和蛋白表达水平。结论：溪黄草中 的冬凌草甲素具有抗癌活性，其抗癌活性通过提高Hepa1c1c7细胞中NQO1基因的转录及翻译水平以增加QR活性实 现，并且其抗癌功能主要通过激活PI3K通路、抑制ERK通路进行信号传导。研究结果为深入开展溪黄草和冬凌草 甲素的癌症化学预防研究奠定前期理论基础。 关键词：溪黄草；冬凌草甲素；醌还原酶；Hepa1c1c7细胞株；信号通路 Oridonin-Induced Quinone Reductase Activity and Its Mechanism in Mouse Hepatoma Hepa1c1c7 Cells * * WANG Zuo, WANG Lu, CHEN Zhongzheng , LAO Yang, LIU Xingyi, GAO Xiong, YAN Ni, LIN Xiaorong, ZHANG Yuanguan, LI Bin (College of Food Science, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China) Abstract: To screen and identify the anticancer components of Rabdosia serra (Maxim) Hara, the effects o