小鼠肿瘤细胞分离液1070-天恩泽.pdfVIP

天 CAT#: 120909-200 净 常温运输和保存 沙 系 列 小鼠肿瘤细胞分离液 1.070 Mouse Tumor Cell Seperation Solution 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 本产品是一种无菌、低内毒素水平的密度梯度分离液。其分离原理是根据细胞 的密度差异，通过离心使细胞按相应密度梯度分布，从而将相应细胞从细胞悬液 中分离出来。本产品密度为1.070 ±0.001g/mL。 规格及成分 成 份 编 号 200 mL 大立盒包装 本产品 120909 200 mL 使用手册 120909sc 1 个 运输及保存 室温避光储存，保质期2 年。 自备试剂 PBS 或组织稀释液 使用方法 注意： 如果要进一步对分离的细胞进行培养，那在制备单细胞悬液和分离细胞的 过程均需无菌操作，所用试剂和耗材均需无菌以避免微生物污染。部分塑料制品 （如聚苯乙烯）因其带有的静电作用，可能会导致细胞挂壁，影响分离效果。 一：肿瘤浸润组织单细胞悬液的制备 1. 在无菌条件下摘取肿瘤浸润组织，用眼科剪将肿瘤浸润组织剪成小块。注意： 待分离的肿瘤浸润组织必须新鲜，避免冷冻和冷藏。 2. 将尼龙筛网或细胞过滤筛放置于平皿上，加入少量全血及组织稀释液（保证 肿瘤浸润组织及获得的细胞处于液体环境中）。 3. 将肿瘤浸润组织放置于筛网上，使用注射器活塞或者是无菌镊子来研磨肿瘤 浸润组织（尽量控制研磨力度，保持筛网悬空，避免在皿底上直接研磨而造 成大批细胞死亡）。研磨完全后使用全血及组织稀释液冲洗筛网，收集细胞 悬液，再经滤网过滤。 8 9 4. 将细胞悬液的浓度调到在10 ~10 个细胞/mL。 注意：也可用胶原酶消化法从肿瘤浸润组织得到单细胞悬液。 二：肿瘤细胞的分离。 5. 取一支适当的离心管，加入与肿瘤浸润组织单细胞悬液等量的分离液（分离 液不得少于3mL，总体积不能超过离心管的三分之二，否则会影响分离效果）。 注意：开封前要颠倒混匀本产品，请在无菌条件下启封，避免微生物污染。 6. 小心吸取单细胞悬液加于分离液液面上，注意保持两液面界面清晰。（可以 使用巴氏德吸管吸取单细胞悬液，然后小心的平铺于分离液上，因为两者的 密度差异，将形成明显的分层界面。） 7. 水平转子400~600g室温离心15~30min（根据肿瘤浸润组织单细胞悬液的量 确定离心条件，细胞悬液体积越大所需的离心力越大，离心时间越长，最佳 的分离条件需摸索）。注意：分离液使用时应始终保持室温（18℃~25℃）， 如室内温度较低，可将分离液预热。不能在4℃或者是温度较低的条件下离心， 否则会导致白膜层中红细胞污染加重。 8. 离心后将出现明显的分层 （见下图）：最上层是稀释液层，中间是透明的分 离液层，稀释液与分离液之间的白膜层即为细胞层，离心管底部是红细胞与 细胞碎片。 9. 小心的吸取白膜层 （细胞层）的细胞到15mL洁净的离心管中。 10. 加入自备的10mL PBS或细胞洗涤液洗涤到细胞中，