从牛奶中分离纯化高产nisin的菌株,并进行菌种的初步鉴定.doc

项目编号： “研究创新实验”项目申请书 项目名称 从牛奶中分离纯化高产nisin的菌株，并进行菌种的初步鉴定 项目负责人 年级、专业 联系电话 电子邮件 指导教师（姓名及职称） 填表日期 2011 年 12 月 15 日 国家级生物实验教学示范中心制表 填表说明 1、《研究创新实验项目申请书》要按顺序逐项填写。填写内容要实事求是，讲究诚信，不能有雷同；表达要明确、严谨。空缺项要填“无”。 2、格式要求： （1）一律用A4纸打印，于左侧装订成册。 （2）字体：中文用宋体，英文和数字用Times?New?Roman字体标题编排应采用分级编号标题编排应采用分级编号nisin的菌株，并进行菌种的初步鉴定 经 费 650（元） 起止时间 2012年 4 月至2012 年 10月 负责人 学号 姓名 年级 专业 联系电话 E-mail 参加成员 指导教师 姓名 职称 职务 E-mail 联系电话 签名 一、项目申请理由（包括项目背景及自身具备的知识、素质、能力和已参加过的研究等条件） （一）、项目背景 Nisin是乳酸乳球菌产生的一种抗菌多肽，成熟的分子中含有34个氨基酸残基,其化学结构含有由5个硫醚桥组成独特的内环结构，分子量为3 500Da。自1928年美国的L.A.Rogers等首次报道了Nisin这种抑菌物质以后，人们迅速开展了有关乳链菌肽的研究和应用，作为一种有效的食品防腐剂，已经广泛应用于肉类、牛奶、干酪、蔬菜等食品的防腐处理。基于Nisin所具有的自然和安全的特点，国外已进入工业化大生产阶段，我国在此领域相比较落后，国内Nisin的产量还远不足以满足各个行业的需求，所以利用各种途径选育高产Nisin的菌株，提高Nisin产生菌的单位产量，对于降低Nisin的生产成本，扩大Nisin的使用范围有重要意义。 （二）、自身介绍 我是大三的学生，在前两年的学习生活中我们系统的学习过无机化学、有机化学、分析化学、生物化学等有关的生物化学方面知识，而且我已在上学期系统学习过微生物学，并在不久前完成了微生物生物学实验对于土壤中微生物的分离纯化，并涉及乳酸乳球菌中Nisin效价测定的相关内容，其中许多的知识和技能可以直接用于本实验，所以保证了我具有完成本实验的能力。此外，我在过去的一年中做了有关用秀丽线虫筛选中药中有效组分的微生物创新实验，并取得一定的成果，对于创新方法和技能都有较深刻的体会，相信我具有自我设计和完成实验的能力。 [1] 二、项目研究内容（目前研究的现状、主要研究内容，重点和难点及创新点，研究思路和方法等） （一）、研究现状 Nisin作为一种有效的食品防腐剂，已经广泛应用于肉类、牛奶、干酪、蔬菜等食品的防腐处理。基于Nisin所具有的自然和安全的特点，国外已进入工业化大生产阶段，我国在此领域相比较落后，国内产Nisin菌株的的产量较低，导致Nisin的生产成本较高，使得 Nisin的使用有较大限制。 （二）、主要研究内容 1、从牛奶中分离纯化产Nisin菌（初筛）； 2、分离高产产Nisin菌株； 3、菌种鉴定； （三）、重点、难点 1、如何从牛奶中的众多微生物中分离出产Nisin菌； 2、分离高产菌的方法技术； 3、菌种的鉴定方法； 4、无菌操作的技术和方法； （四）、创新点 1、从牛奶这种日常生活常见而又含较多产Nisin菌的原料来筛选产Nisin菌株具有可行性和创新性。 2、不仅筛选了高产Nisin菌株，还通过设计一系列生理生化反应及染色等方法对菌株进行初步鉴定。 （五）、研究思路和方法 1、含 50IU·mL－1Nisin 的 M17G 液体增殖培养基 M17 培养基（g/L）：多胨 5，大豆蛋白胨 5，酵母膏 2.5，牛肉膏 5，乳糖 5，抗坏血酸 0.5，β-磷酸甘油二钠 19，MgSO4·7H2O 0.25，pH 值 6.8，121℃灭菌 15min。 2、从牛奶中对产Nisin菌进行初筛 1)样品的稀释：原料乳的细菌总数比较多,取样品10mL，加入90 mL的稀释液中,稀释至10倍;从10倍稀释液中取1 mL,加入9 mL稀释液中,稀释至100倍;按此方法将样品稀释至10-8。 2) 接种与培