ELISA相关重要概念介绍.PDF

ELISA ELISA EELLIISSAA 相关重要概念介绍 1.OD A 1.OD A 11..OODD值与AA值：ELISA比色结果的一般用通用光密度（OplicalDensity，OD） 来表示，现按规定用吸光度（Absorbence，A）作为简称，OD值及A值两者 含义相同，都是指用酶标仪的比色结果。 2. 2. 22.. 单波长及双波长：是指用酶标仪比色时，直接用底物的吸收波长读值，以 前常用的底物OPD的吸收波长为492nm，现在常用底物的TMB的吸收波长 为450nm，这叫单波长读值；除此之外，为使所读的数值更准确，可再设置 一个参考波长，一般设为630nm或620nm，以排除干扰因素（如板底刮花） 的影响，这叫双波长读值。 3. CutOff C.O. 3. CutOff C.O. 33.. 临界值（CCuuttOOffff，CC..OO..）：是根据实验中阴阳性对照的数值计算出来，用来 判断标本是阳性还是阴性的数值。竞法法试剂中，小于等于临界值为阳性； 其他原理的试剂，都是大于临界值为阳性。 4.S/C.O. C.O. 4.S/C.O. C.O. 44..SS//CC..OO..值：是指标本（Sample）的OD值与临界值（CutOff，CC..OO..）的比值。 用于判断是否为阳性或阳性的强弱 5. 5. 55.. 空白对照：起到调零的作用。调零是指所有标本孔及质控孔的OD 值减去 空白对照孔的OD 值，得到标本孔及质控孔的最终的数值。一般单波长读值 必须以空白调零（以排除干扰），双波长读值不必。 6. 6. 66.. 阴性对照：用于计算临界值，以判断标本的阴阳性。同时控制试剂盒质量 特异性是否合格。 7. 7. 77.. 阳性对照：控制实验的有效性和试剂盒的稳定性（灵敏度），一般来讲如果 阳性对照OD值小于一定的数值，实验将无效；有些试剂也用来计算临界值。 8. HookEffect 8. HookEffect 88.. 钩状效应（HHooookkEEffffeecctt）：在以前的免疫沉淀反应中称为前带现象。是指标 本中待测抗原浓度相当高时，过量抗原分别和固相抗体及酶标抗体结合，而 不再形成夹心复合物，使得检测结果低于实际含量；如待测物为抗体，同样 可能会现此现象。常见于一步法的试剂中。钩状效应严重时甚至可能出现假 阴性结果。现在厂家生产的一步法试剂中，都会把固相抗体或抗原及酶标抗 体或抗原调制成高浓度，抗原抗体比此浓度高的标本几乎不存在，所以出现 钩状效应可能性几乎为零。 9. 9. 99.. 试剂的特异性：是指试剂对非特异性物质的辨别能力。一般用试剂的真阴 性率或假阳性率来表示。真阴性率越高试剂的特异性越好。假阳性率越高试 剂的特异性越差。 10. 10. 1100.. 试剂的灵敏度（敏感性）：是指试剂对待测物的检出能力。一般分为分析 灵敏度和临床灵敏度两部分：①分析灵敏度一般用待测物的最低检出量来表 示。最低检出量越低，试剂的分析灵敏度越高；用同一弱阳性质控品测定不 同试剂时，吸光度值越高此试剂的分析灵敏越高。②临床灵敏度指对临床真 阳性样本的检出程度，真阴性率越高试剂的临床灵敏度越好，假阴性率越高 试剂的临床灵敏度越差。③分析灵敏度和临床灵敏度不一定成正相关，即最 低检出量低的试剂不一定临床灵敏度就好（可能出现包被片断不全导致的漏 检）。④客户通常所说的灵敏度一般指分析灵敏度。 11. 11. 1111.. 精密度：是指使用某一试剂时，多次重复一份中阳性标本，实验的结果偏 离平均值的程度，偏离越小，实验的重复性越好，精密度越好。精密度一般 用CV（变异系数）表示。现在国家要求ELISA试剂生产厂家，把批内CV% 控制在15%以内。 13. 13. 1133.. 稳定性：是指试剂在能达到规定标准的情况下的储存时间，决定了试剂的 有效期。ELISA产品一般采用破坏性试验进行检验，即是将试剂存放于37℃ 保存，定期测定其灵敏度，特异性和精密度等指标，直到其质量指标开始下 降为不合格为止。通常认为37℃保存一天相当于2-8℃保存2月。 14. 14. 1144.. 阳性