黄鳝单条染色体的显微分离及特异性检测3.PDF

动物学报 　48 ( 1) :114～120 , 2002 A cta Zoologica S inica 　　　　　 　 黄鳝单条染色体的显微分离及特异性检测 戢福云　余其兴 　郭一清　海　燕　周荣家　刘　利 (武汉大学生命科学学院 , 武汉 430072) 摘　要 　建立了显微分离黄鳝单条染色体及检测其特异性的方法。在 Olympus 倒置显微镜下用毛细玻璃微针手 - 32 工分离黄鳝减数分裂 Ⅰ终变期 3 号染色体 , 将其 DNA 作模板进行 DOPPCR 扩增后 , 分别以 α PdCTP 和 Biotin11dU TP 标记的单条染色体 DNA PCR 扩增产物及 Biotin11dU TP 标记的大豆 18S rRNA 基因作探针进行 Southern杂交、FISH 和 Dot 杂交来检测其特异性。结果表明 : ( 1) 减数分裂 Ⅰ终变期染色体标本是进行染色体 显微操作的理想材料 ; (2) DOPPCR 扩增产物片段在 200～1 000 bp 之间 , 平均 600 bp 左右 ; (3) 杂交结果显 示 , 本研究所获得的单条染色体是黄鳝 3 号染色体 ; (4) 与显微操作仪和微激光分离相比较 , 该方法不需要昂 贵仪器 , 在常规实验室即可操作 , 具有广泛的普及应用意义。 关键词 　黄鳝 　单条染色体 　显微分离 　DOPPCR 　Southern 杂交 　FISH 　Dot 杂交 　　染色体显微操作是在倒置显微镜下 , 利用毛细 11 　实验材料 玻璃微针或激光分离特定染色体或切割其特定片段 111 　实验动物 　雌性和雄性黄鳝均购于武汉珞 并进行体外 DNA 扩增的一种技术。该技术由 珈山集贸市场 。 Scalenghe 等 ( 1981) 首次应用于果蝇唾腺染色体 112 　DOP 引物序列 　5′CCGACTCGA GNNNN 第三区的分离及微克隆。最先在国内应用此技术的 NNA TGTGG 3 ′, 由 Gibco BRL 合成 ( 北京原平生 ( ) ) 是湖南医科大学夏家辉等 邓汉湘等 , 1991 , 他 物技术公司代理 。 们在人类高分辨染色体上进行显微操作 , 为真核生 113 　探针 DNA 　质粒 pSR1 2B3 为含大豆 物基因组基因克隆建立了一个特异性强、简便、快 ( Soybean) 18S rRNA 基因片段的重组质粒 , 插入 速而有效的方法。其后 , 该技术被用于植物的研究 片段为 105 kb (质粒提取、酶切后片段大小符合 也有少许几篇报道 (宋文芹等 , 1996 ; 王兰岚等 , 背景资料) (Montijn et al . , 1998) 。 ) 32 1997 ; 马有志等 , 1999 。但在鱼类尚未见研究报 114 　α PdCTP 、Biotin11dU TP 及其荧光检测 道。黄鳝 ( Monopterus albus) 是硬骨鱼类合鳃目 系统、尼龙膜及工具酶分别购于中国科学院武汉病 合鳃科黄鳝亚科的惟一代