微生物的染色方法1简单染色法原理微生物体型很小菌体多为.DOC

微生物的染色方法 簡單染色法 原理： 微生物體型很小，菌體多為透明無色，若將微生物製成懸浮液，至於顯微鏡時，通常僅能看見輪廓或細胞內較明顯的器官，不易與背景(水)有所區別，對微生物構造及特性的了解因此受到限制。 微生物染色原理主要是細胞表面或細胞內活化裝置(active site)與染料分子產生物理作用與化學反應。細胞中的蛋白質、核酸會分解氨基酸，並可在鹼性溶液中形成帶陰電的原子團與陽電荷納離子或鉀離子鹽類。此鹽類可與帶陽電荷的鹼性染劑(如：甲烯藍)產生離子交換現象： (Na)┼ (細胞蛋白質或核酸)─ + (甲烯藍)+(Cl)─ ↓離子交換作用 (甲烯藍)┼ (細胞蛋白質或核酸)─ + (Na)+(Cl)─ 微生物染色方法依微生物型態、特徵、細胞構造等目的的不同可分為簡單染色法與鑑別染色法兩大類。其中利用單一染料使微生物著色的方法即稱為簡單染色體法(簡稱單染法) 設備 (一)器材 1.載玻片 2.蓋玻片 3.接種環 4.酒精燈 5.塑膠(玻璃)滴管 6.試鏡紙(吸水用) 7.洗滌瓶 8.計時器 9.燒杯(1000ml) (二)儀器 1.光學顯微鏡 (三)菌種 1.枯草桿菌(Bacillus subtilis) 2.大腸桿菌(Escherichia coli) 3.未知菌 4.口腔細胞 步驟 1.先取一滴二段水滴於載玻片正中央，用牙籤刮取口腔內面之黏膜，混水均勻塗抹於一載玻片上； 2.取準備好之菌液一滴，均勻塗抹於一載玻片上； 3.將準備好之玻片在酒精燈上加熱使水蒸發，並達固定效果； 4.用甲基藍染色30秒； 5.清洗染劑時，要以背面沖洗法，避免將菌沖掉； 6.觀察各樣本，並記錄其放大倍率、微生物之大小、形狀等。 革蘭氏染色法 原理： 此法使用一種以上的染劑進行染色，主要用來區別細胞間或細胞某部位的染色及鑑別菌體或菌體中的特殊部位。 常見得鑑別染色法：革蘭氏染色法(Gram stain)由於染色法簡單，判定容易，已成為實驗室鑑定未知菌中的必經手續，目前已知與環工有密切關係之微生物多為革蘭氏陰性菌。 染色步驟首先依單染法智作為生物細胞固定抹片，接著用四種溶液，結晶紫、碘液(媒染劑)、乙醇(脫色劑)及沙番紅分別處理，結果將微生物分成兩類，及革蘭氏陽性與革蘭氏陰性細菌。 凡是被乙醇脫色並接受番紅染色，使細菌成紅色反應者為革蘭氏陰性菌；若不被乙醇脫色仍保持結晶紫及碘所形成的複合物於細胞中呈紫色，則稱為革蘭氏陽性細菌。 設備 (一)器材 1.載玻片 2.蓋玻片 3.接種環 4.酒精燈 5.塑膠(玻璃)滴管 6.試鏡紙(吸水用) 7.洗滌瓶 8.計時器 9.燒杯(1000ml) 10.牙籤 11.濾紙(配藥用) (二)儀器 1.光學顯微鏡 (三)菌種 1.枯草桿菌(Bacillus subtilis) 2.大腸桿菌(Escherichia coli) 3.未知菌 操作流程 1.塗抹 從液體培養基取樣 ↓ 將一滴或二滴管之菌液置於在載玻片上 ↓ 以接種環將菌液均勻塗抹 2.乾燥 風乾—在室溫下讓此抹片自然乾燥 3.固定 固定—將抹片迅速通過火燄幾次 4.染色 菌落抹片以結晶紫染色60秒 ↓ 以二段水洗去染料 ↓ 菌落抹片以碘液染色60秒 ↓ 以二段水洗去染料 ↓ 菌落抹片以酒精脫色30秒 ↓ 以二段水洗去染料 ↓ 菌落抹片以沙番紅進行對比色30秒 ↓ 以二段水洗去染料 5.吸乾水分之後鏡檢 以吸水紙輕輕吸乾水分 → 至於顯微鏡下觀察 問題與討論 使用之菌種中，何者為G或G之代表菌？ Ans： 大腸桿菌屬於G─ (革蘭氏陰性菌) 枯草桿菌屬於G─ (革蘭氏陰性菌) 未知桿菌屬於G─ (革蘭氏陰性菌) 染劑為何？染色步驟為何？ Ans： 1.塗抹 從液體培養基取樣 ↓ 將一滴或二滴管之菌液置於載玻片上 ↓ 以接種環將菌液均勻塗抹 2.乾燥 風乾—在室溫下讓此抹片自然乾燥 3.固定 固定—將抹片迅速通過火燄幾次 4.染色 菌落抹片以結晶紫染色60秒 ↓ 以二段水洗去染料 ↓ 菌落抹片以碘液染色60秒 ↓ 以二段水洗去染料 ↓ 菌落抹片以酒精脫色30秒 ↓ 以二段水洗去染料 ↓ 菌落抹片以沙番紅進行對比色30秒 ↓ 以二段水洗去染料