株芽孢杆菌srrna基因序列测定与系统发育学分析-四川工业.doc

23株芽孢杆菌16S rRNA基因序列与系统发育分析张晓娟1,2,3，宋萍1,2,3*，王柱1,2,3，张蓓蓓1,2,3，周光燕1,2,3，王菊英1,2,3 （1.四川省微生物资源平台菌种保藏中心；2.中国工业微生物菌种保藏中心西南菌种站；3.四川省食品发酵工业研究设计院；成都 611130） 摘要：采用16S rRNA基因序列分析对西南菌种站（SICC）收集保藏的23株芽孢杆菌进行复核鉴定，改良的CTAB法提取细菌DNA，通用引物F1、R1对菌株进行16S rRNA扩增，Clustal X对序列进行比对分析，用MEGA 4进行建树分析。鉴定结果表明其中13株与原学名一致，1株与原学名不符，其余9株在-J发育树中同时与枯草芽孢杆菌Bacillus?subtilis）、解淀粉芽孢杆菌B. amyloliquefaciens）汇聚到一个分支，需要用特异PCR方法进一步核实。 关键词：芽孢杆菌16S rRNA；序列分析系统发育 Identification of 23 Bacillus Strains by Phylogenetic Analysis of 16S rRNA Gene Sequence ZHANG Xiao-juan1,2,3， Ping1,2,3*，W Zhu1,2,3，Z Bei-bei1,2,3，Z Guang-yan1,2,3，W Ju-ying1,2,3 (1. Sichuan Microbiological Resource Infrastructure Culture Collection Center，Chengdu 611130 ,China ；2.Sichuan Center of Industrial Culture Collection Chengdu 611130 ,China；3.Sichuan Academy of Food and Fermentation Industries, Chengdu 611130 ) Abstract：We identified 23 Bacillus strains from SICC by 16S rRNA gene sequence analysis. The genomic DNA was isolated and purified with the improved CTAB methods. The sequences of 16S rRNA were amplified by PCR with the bacterium universal primers and the purified PCR products were directly sequenced. The correct sequences were aligned with Clustal X and the phylegenetic tree was constructed by MEGA 4. 13 strains support the original identification results , one strains belong to Bacillus circulans , B.?subtilis and B.amyloliquefaciens need to identify with specific PCR. Key words：Bacillus sp. ，16S rRNA，Gene sequence analysis，Phylegenetic tree 收稿日期：2012-4-13 作者简介：张晓娟（），女，硕士，工程师，从事微生物菌种资源开发、利用、保藏及标准化整理工作。 基金项目：四川省微生物资源共享平台项目 通讯作者：宋萍 （1958-），教授，；Tel：028-827614640前言芽孢杆菌是重要的工业微生物菌种资源，其中常见的包括枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、地衣芽孢杆菌(B Licheniformis)、环状芽孢杆菌(B circulans)、解淀粉芽孢杆(B.amyloliquefaciens)、蜡状芽孢杆菌(Bcereus)、梭状芽孢杆菌(Bfusiformis)等，广泛应用于西南菌种站作为西部地区最大的工业微生物菌种资源保藏机构，收集拥有芽孢杆菌300余株，为最大限度实现资源的保护、共享和持续利用，为产业、科研、教学日益增长的微生物资源需求及提升创新能力提供准确、优质、高效的菌种资源保障和技术支撑，对菌种资源进行复核鉴定具有重要指导意义。 自1986年Mullis[1]发明PCR技术以来，的分类鉴定