专题12酸性土壤中微生物种类的研究微生物的分布范围是很广的.doc

专题1.2、酸性土壤中微生物种类的研究 微生物的分布范围是很广的，种类也是非常多的，但由于微生物的个体很小、不易在实验室环境下培养等特征，所以绝大多数的微生物还没有被人类所认知。据科学家推测人类已发现的微生物种类还不到微生物种数的1%。微生物代谢能力非常盛，繁殖能力很强等，这些使得微生物对人类的生活生产有着重要的作用，尽管有一部分微生物（如病原微生物等）对人类是有害的，但是绝大多数微生物（天然或经改造后）对人类是有益的，因此从环境中寻找有益微生物、发现探究、改造有害微生物以及研究微生物的功能机制是微生物学的主要研究内容。土壤中的营养物质非常丰富，被誉为微生物的“天然培养基”，其实包含着数量巨大的微生物种群，是我们发现微生物新物种、研究微生物的重要源地。 一、培养基配制与灭菌 实验目的 1、掌握培养基的配制方法及灭菌方式； 2、了解野外采样前的准备工作和样品的如何采集。 实验原理 由于微生物种类繁多，一般我们采用选择性培养基，根据不同微生物对营养物质需求、生长环境的差异性，设置特定的选择性培养基，分离得到拟培养的微生物类群。样品采集根据拟分离微生物的生长特点，选择合适的采样地点，注意在样品的采集、运输过程中尽量保持采样地的真实性。 实验材料和试剂 1、材料与仪器：保温箱（远距离采样需要）、冰袋、铲子、信封、锤子、打桩器、镊子、勺子、水桶、封口膜、线（绳）、便携式pH计、还原电位测定仪、温度计、GPS、玻棒、涂布棒、移液器、培养皿、烧杯、三角瓶、湿热灭菌锅、干热灭菌器、超净台、酒精灯、恒温水浴锅、电子天平、药匙、橡皮筋 2、试剂：盐酸、氢氧化钠、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂 3、培养基配方： 牛肉膏 5g 　　 蛋白胨 10g 　　 氯化钠 5g 　　 琼脂 20g 　　 调PH4.0，溶解定容至1000ml 实验步骤 按照如上的培养基配方，配制培养基，配制流程如下： 称药品→溶解→调pH值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。 1、称量药品 跟据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速，牛肉膏易粘称量纸，一起将其倒扣在烧杯中。 2、溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，补足水分。如果配方中有淀粉，则先将淀粉用少量冷水调成糊状，并在火上加热搅拌，然后加足水分及其它原料，待完全溶化后，补足水分。 3、调节pH 根据培养基对pH的要求，用1M NaOH或1 M HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸或酸度计等。 4、溶化琼脂 固体或半固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置电炉上一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 如果倾倒平板，可直接将一定量的琼脂加到相对应量的液体培养基中，直接包扎后放入灭菌锅中灭菌。 5、过滤分装 先将过滤装置安装好。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。 6、包扎标记 培养基分装后加好棉塞或试管帽，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等。 7、灭菌 上述培养基应按培养基配方中规定的条件及时进行灭菌。普通培养基为121℃ 20min，以保证灭菌效果和不损伤培养基的有效成份。培养基经灭菌后，如需要作斜面固体培养基，则灭菌后立即摆放成斜面，斜面长度一般以不超过试管长度的1/2为宜；半固体培养基灭菌后，垂直冷凝成半固体深层琼脂。 8、倒平板 将需倒平板的培养基，于水浴锅中冷却到45～50℃，立刻倒平板。 另：培养基配好后，将培养皿、无菌水等实验中要用到的实验器材用报纸包扎，与培养基一起放入高压灭菌锅中灭菌。培养皿也可以在烘箱中160℃ 2h灭菌。 实验结果（略） 二、酸性土壤中微生物的分离、纯化 实验目的 1、学习生物野外样品的采集； 2、掌握倒平板的方法和几种常用的分离纯化物的基本操作技术； 2、培养学生的科研探索能力以及团结合作精神。 实验原理 1、从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。本实验采用平板分离法：该方法操作简便，普遍用于微生物的分离与纯化，其包括两个方面： （1）