23 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳测定酵母蔗糖酶的相对 - 北京工业大学.docx

酵母蔗糖酶的提取及其性质的研究丁洁，臧清，王然，马翌婷，马雪梅*(北京工业大学，生命科学与生物工程学院，生物化学技术实验室，北京 100022)摘　要:采用SDS 抽提法从酵母中提取蔗糖酶，在SDS 摩尔浓度0.5 mmol/L，温度40℃，提取时间10 h，pH值5.5的提取条件下，进行抽提得到粗酶，经质量分数50 %的乙醇分级沉淀、Mono Q 阴离子交换柱层析纯化后，制得高纯度的酵母蔗糖酶。利用考马斯亮蓝法测定不同浓度梯度的标准酵母蔗糖酶溶液的吸光度值，并绘制标准曲线，然后测定酵母蔗糖酶样液的吸光度值，从而得出该蔗糖酶样液的浓度，分别为：A样液279.53 μg /mL；B样液873.18 μg /mL。最后利用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定酵母蔗糖酶的相对分子质量是60kDa。关键词: 酵母蔗糖酶；SDS法提取；考马斯亮蓝法；SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳Study on Purification and Properties of Invertase from YeastDING Jie, ZANG Qing, WANG Ran, MA Yi-ting, MA Xue-mei*(Beijing University of Technology, College of Life Science and Bio-engineering, Laboratory of Biochemical technology,Beijing, China,100022)Abstract：The experiment extracted invertase from brewer’s yeast using SDS extraction.Under the condition ofthe SDS concentration 0.5mmol/L, temperature for 40 ℃, time for 10h, pH value for 5.5to get coarse enzyme extraction.Then the purified invertase was obtained by precipitatation with 50％ethyl alcohol and Mono Q chromatography. The absorbance of yeast invertase solution can be determined byCoomassie Brilliant Blue, then draw the standard curve of yeast invertase solution so that we can know the concentration of yeast invertase solution:A samples of 279.53 μg /mL, B samples of 873.18μg /mL. The relative molecular mass of the yeast invertase was determined by SDS polyacrylamide gel electrophoresis.Key words :Yeast Invertase ;SDS Extraction; Coomassie Brilliant Blue; SDS Polyacrylamide gel electrophoresis蔗糖酶( Sucrase , EC 3. 2. 1. 26)又称转化酶( Invertase)。可作用于β-1 ,2糖苷键，将蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖。由于果糖甜度高，约为蔗糖的1. 36～1. 60倍，在工业上具有较高的经济价值。可用以转化蔗糖，增加甜味，制造人造蜂蜜，防止高浓度糖浆中的蔗糖析出，制造含果糖和巧克力的软心糖，还可为果葡糖浆的工业化生产提供新的方法[1]。本文以SDS抽提法从酵母中提取蔗糖酶，经乙醇分级沉淀、Mono Q 阴离子交换柱层析纯化后，制得高纯度的酵母蔗糖酶。利用标准曲线对其进行浓度分析，最后通过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳检测蛋白的方法得到酵母蔗糖酶的相对分子量。1材料与仪器1.1 材料酵母（市售）。1.2主要化学试剂和仪器十二烷基硫酸钠(SDS)，Serva 公司提供；等电点标准品，Amersham 公司提供；其余试剂均为国产分析纯或生化试剂。牛血清蛋白标准溶液、考马斯亮蓝G-250、30%聚丙烯酰胺储存夜、1.5M Tris-HCl、AP、TEMED、溴酚蓝、生理盐水、去离子水、无水乙醇等。UV22201 型紫外可见光分光光度计，Shimadzu公司制造；Waters 650 型高级蛋白纯化系统，Waters 公司制造；Phast System