粗叶悬钩子根部提取物对急性肝损伤大鼠TNF-αIL-1βIL-6影响 .docVIP

粗叶悬钩子根部提取物对急性肝损伤大鼠TNF-αIL-1βIL-6影响 周建衡　李天娇　叶蕻芝　黄　玲 摘　要：目的：探讨粗叶悬钩子根部提取物对大鼠急性肝损伤的治疗作用。方法：以化学方法提取总生物碱、总多糖、总黄酮为治疗药物，通过一次性腹腔注射99.5％CCL4建立大鼠急性肝损伤模型，检测药物对大鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6含量的影响。结果：粗叶悬钩子根部总多糖能明显降低大鼠血清中异常增高的TNF-α、IL-1β、IL-6含量(P＜0.01)减轻大鼠肝细胞坏死程度。总生物碱、总黄酮对大鼠血清TNF-α、IL-1、βIL-6含量有一定影响但没有统计学意义。结论：粗叶悬钩子根部总多糖具有减轻炎症因子对肝细胞造成损伤的作用。 关键词：粗叶悬钩子：总生物碱；总多糖；总黄酮；急性肝损伤；大鼠 粗叶悬钩子(Rubus alceaefolim Poir)为蔷薇科悬钩子属植物，具有活血祛瘀、清热止痛之功效，在民间广泛应用于各型肝炎的治疗。课题组早期的研究表明粗叶悬钩子根部水提物对急性肝损伤有显著的防治作用。为进一步探讨粗叶悬钩子抗肝损伤的作用机制，本研究就粗叶悬钩子根部提取物(总生物碱、总多糖、总黄酮)对急性肝损伤的治疗作用开展研究，探讨其部分机制，现报道如下。 1　材料与方法 1．1 实验药品 粗叶悬钩子根部采自福建安溪，经福建中医学院中药系专家鉴定为双子叶蔷薇科悬钩子属植物；四氯化碳(CCL4)为中国联化化工试剂有限公司上海制造，分析纯批号联苯双酯选用浙江万邦药业有限公司制造，规格1.5ms/丸，250丸/瓶，批号：0402072，用前配成浓度1％；TNF-α、IL-1β、IL-6试剂盒由解放军总医院科技开发中心放免所提供。 1．2实验仪器ESP 350型粉碎机，筛孔径0.6mm；TGL-16G冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂生产)；HH.W21.600电热恒温水浴箱(上海跃进医疗器械厂生产)；SN695型智能放免γ测量仪(上海核所日环光仪器有限公司)。 1．3实验动物 清洁级Wistar大鼠，雌雄各半，体重180-220g。由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，许可证号：SCXK(。　 2 实验方法 2．1 总黄酮的制备(以下简称黄酮)将粗叶悬钩子根于KSP 350型粉碎机中粉碎成粉末，取粗叶悬钩子根粉100g置于1000mL圆底烧瓶中加70％-80％乙醇(固液比为1:6)置调温恒温电热套80~C回流3次，每次回流1.5h，合并提取液，回收乙醇，得浓缩液，静置24h，取上清液与等重量的聚酰胺混匀后填入装有聚酰胺的层析柱，分别以水和95％乙醇洗脱，弃去水洗液，将乙醇洗脱液减压回收乙醇后得浓缩液，将浓缩液置烘箱中50℃以下烘干，得黄色晶体3g(分别以盐酸一镁粉、三氯化铝及碱液检识证明是黄酮类化合物)反复多次共提取黄酮12g。 2．2 总生物碱的制备(以下简称生物碱) 将粗叶悬钩子根于ESP 350型粉碎机中粉碎成粉末，取粗叶悬钩子粉100g置于1000mL圆底烧瓶中加入85％乙醇溶液(固液比1:6)置于调温恒温电热套80℃回流3次，每次3Gmin，合并提取液回收乙醇得浓缩液，加入2％HCL使得pH为3，静置过夜，抽滤得液体加入氨水调pH为10再以2800r/min速度离心15min得沉淀，晾干，得15g粉末。(所得物质分别碘一碘化钾、碘化铋钾、饱和苦味酸检识证明是生物碱)。反复多次共提取60g。 2．3总多糖的制备(以下简称多糖) 将粗叶悬钩子根于ESP 350型粉碎机中粉碎成粉末，取粗叶悬钩子粉100g置于5000mL烧杯中加人多量水(固液比1:12)煎煮3次，每次1.5h，合并提取液于1100r/min离心15min得上清液，蒸发至小体积，加入元水乙醇使得醇浓度不低于60％，析出沉淀，过滤得析出物加水溶解再次置1100r/min离心15min得液体，加无水乙醇使醇浓度达80％以上，置冰箱中静置过夜，倾出上清液得沉淀加无水乙醇搅拌后过滤，得滤渣，滤渣用无水乙醇洗涤多次得总多糖1.5g(所得物质用紫外分光光度计检测)。反复多次共提取6.0g。 2．4分组与给药实验分为空白组、模型组、对照组和药物治疗组，空白组给予生理盐水一次性腹腔注射。注射剂量为0.2mL，其余各组给予99.5％CC4按0.1mL/100g体重剂量一次性腹腔注射造成大鼠急性肝损伤模型。24h后灌胃给药，空白组及模型组给予生理盐水灌胃，对照组给予联苯双酯灌胃(0.1g/kg浓度为1％)，其余各组分别给予粗叶悬钩子生物碱、多糖、黄酮灌胃，分低、中、高(1:2:4)3个浓度。生物碱低剂量浓度6％，中剂量浓度12％，高剂量浓度24％，分别相当于生药56g(含生物