常用液相色谱柱原理.ppt

（4）特别提醒：再生时最好选择不具备在线脱气的独立泵送系统 色谱仪器进行，以防正相溶剂损坏脱气机密封膜或分子筛及比例阀等仪 器精密部件。 3.2正相色谱柱（Normal –Phase Chromatography column） 3.2.1氨基柱（-NH2） ①在正相条件下使用时，故障率较低。但要注意不可进样含有醛基、羰基的化合物，不可用于还原糖的分析；流动相要彻底脱气，并不得含有羰基化合物和过氧化物（质量较差的乙醚、四氢呋喃等溶剂中含有少量）。任何时候更换流动相时都要确保新流动相与柱子原保存液可互溶，若不互溶，必需用异丙醇过渡。 当使用氨基柱进行酸性物质分析时，酸性物质溶液有质子存在，会使略带负电荷的氨基官能团质子化，导致使用一段时间后被测成分保留性质有所改变或柱效下降。这时，建议按如下方法处理： 首先用异丙醇，以0.5ml/min流速，冲洗约50倍柱体积→然后用甲醇，以0.5ml/min流速，冲洗约50倍柱体积→再用异丙醇，以0.5ml/min流速，冲洗约10倍柱体积过渡，回到平常使用的正相流动相平衡2h，进样检测即可。若上述方法不凑效，可尝试按以下程序冲洗与再生： 首先用含0.5%～1.0％NH3的50%乙腈-50%水溶液，以1.0ml/min流速冲洗该柱约5～10倍柱体积→然后用不含NH3的50%乙腈-50%水溶液，以1.0ml/min流速冲洗该柱约5～10倍柱体积以洗去多余NH3→再用添加少许NH3（如0.1％）的酸性分析物的流动相平衡2h左右，进样检测即可。 ②在反相条件下使用时，-NH2键会水解，尤其是在该柱子pH范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱效会下降很快，所以故障率较高。若出现柱压增高柱效降低等情况，建议采用如下方法处理： 若流动相含有缓冲盐，先以流动相比例的水-有机溶剂，以检测分析时同流速冲洗约30倍柱体积→再用纯甲醇，以1.0ml/min流速冲洗约50倍柱体积→然后用异丙醇，以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积过渡→再用二氯甲烷以0.6ml/min流速冲洗色谱柱约10倍柱体积→再用异丙醇以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积过渡回到甲醇条件下，以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积，密封保存或用流动相平衡2h左右（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。若上述方法不凑效，可尝试如下程序冲洗与再生： 95％水-5％乙腈，以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→THF（四氢呋喃），以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积→95％乙腈-5％水以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→保持95％乙腈-5％水，以低流速0.2-0.5mL/min冲洗过夜→流动相平衡2h（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。 3.2.2氰基柱（-CN） ①在正相条件下使用时，故障率较低，操作和维护与氨基柱基本完全相同。但当柱子使用一定时间后，若出现柱效下降，柱子老化，可通过冲洗再生来恢复其柱性能。具体方法如下： 用氯仿以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用异丙醇以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→然后用二氯甲烷以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用流动相（pH1.5-7.0为佳）平衡1h，待基线平稳，进样检测即可。 ②在反相条件下使用时，-CN键会水解，尤其是在pH1.5-7.0范围以外，在极端酸性和碱性条件下柱效会下降很快，所以故障率较高。如果在这个条件下使用，一定要注意及时清洗。若出现柱效下降，柱子老化，可通过冲洗再生来恢复其柱性能。具体方法如下： 若流动相含有缓冲盐，先以流动相比例的水-有机溶剂，以检测时同流速冲洗约30倍柱体积→再用95%水-5%乙腈以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用THF（四氢呋喃）以0.6ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用95%乙腈-5%水以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用流动相平衡2h（若流动相含有缓冲盐，需先用与流动相同比例的水-有机相以1.0ml/min流速冲洗约30min），进样检测即可。若上述方法不凑效，可尝试如下程序冲洗与再生： 用95%水-5%乙腈以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用 THF（四氢呋喃）以0.5ml/min流速冲洗约10倍柱体积→再用95%乙腈-5%水以1.0ml/min流速冲洗约10倍柱体积→保持95%乙腈-5