5（6）-羧基荧光素标记2’-脱氧尿苷的合成.pdfVIP

2008年第28卷 有 机 化 学 Vb1．28．2O08 第2期，330~334 Chinese Journal of Organic Chemistry No．2．330～334 · 研究简报· 5(6)一羧基荧光素标记2 -脱氧尿苷的合成 丁海新 万 明 阳如春 肖伟洪 肖 强米 (江西科技师范学院有机功能分子研究所 江西省有机功能分子重点实验室 南昌 330013) 摘要 以5．碘．2’一脱氧尿嘧啶为起始原料，5(6)．羧基荧光素为荧光标记物，经6步反应合成了5(6)．羧基荧光素标记的2r- 脱氧尿苷，并利用高效液相色谱(HPLC)， H NMR和 C NMR对目标化合物的纯度和结构进行了表征． 关键词 2，-脱氧尿苷；5(6)．羧基荧光素；荧光标记；分离 Synthesis of Deoxyuridine Labeled with 5(6)-Carboxyfluorescein DING，Hai—Xin WAN，Ming YANG，Ru—Chun XIAO，Wei—Hong XIAO，Qiang术 (Jiangxi Key Laboratory of Organic Chemistry，Jiangxi Science and Technology Normal University，Nanchang 330013) Abstract 2-Deoxyuridine labeled with 5(6)-carboxylfluorescein was synthesized in six steps from 5-iodo．2’dexoyuridine．Their structures were analyzed and characterized using HPLC．1H NMR and 13C NMR spectra． Keywords 2-deoxyuridine；5(6)-carboxylfluorescein；fuorescence labeling；separation 在后基因组时代，科学家从一些公众数据库可以很 在荧光素标记的寡核苷酸探针制备中，通常是采用 容易地获取大量的DNA序列信息IJ]．但是如何解读和 后修饰的方法将荧光素偶联到寡聚核苷酸上，这种方法 应用呈现在我们面前的人类基因组序列，是整个人类面 需要对寡聚核苷酸进行进一步的纯化以除去未反应的 临的重大挑战l2】，其中荧光 DNA探针技术具有重要的 荧光素．而在实际应用中通常很难完全去除未反应的荧 作用．自从Southern于1975年首次开发了DNA探针杂 光素，从而可能会干扰后续的测定，因此先标记的方法 交技术以来，该技术已经被广泛应用于分子生物学、分 具有一定的优越性 J． 子遗传学和临床医学等学科领域 】，进行核酸的定性、 我们设计合成了一种新的5(6)．羧基荧光素标记的 定量检测和基因疾病诊断．在该技术的实际应用中，核 2’．脱氧尿苷作为核酸探针．通过Mitsunobu反应制备酞 酸探针的制备与标记是其中的重要一步，影响该技术的 酰亚胺基保护的戊炔2【_ ，运用Sonogashira反应将炔键 实际应用与发展．核酸探针的标记有同位素标记和非同 与碘代嘧啶环偶联 J，然后通过酰胺键将5(6)．羧基荧光 位素标记两大类，荧光标记法是一种非同位素标记，因 素连接到核苷上．巧妙地利用5位炔基的刚性，炔基同 其灵敏度高，且不存在环境污染以及放射性废物处理等 嘧啶环共平面，在合成得到的荧光探针中，降低荧光素 问题，已成为目前关注的热点I4】．荧光素及其衍生物具