第九章 细菌的培养与分离技术2013.ppt

第九章 细菌的培养与分离技术 细菌培养是微生物学研究和实践的重要技术。以此可培养、鉴定和利用细菌。 细菌的培养 细菌的分离技术 菌落 第一节 培养基 一、培养基的种类和选择 培养基（culture medium） 是由人工方法配制而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。 一、培养基的主要成分及其作用 （一）营养物质 1.蛋白胨--氮源 2.肉浸液及牛肉膏--氮源和碳源 3.糖（醇）类--碳源，鉴别细菌 4.血液--辅酶、血红蛋白，鉴别细菌 5.鸡蛋与动物血清--特殊培养基 6.无机盐类 7.生长因子 （二）水分 不含杂质的蒸馏水或离子交换水 （三）凝固物质 最合适的凝固剂是琼脂 100℃融化，45℃以下凝固。 （四）抑制剂---选择性培养基 （五）指示剂---鉴别培养基 二、培养基的分类 按性状分为： 固体培养基（琼脂1.5—2.0% ） 半固体培养基（琼脂0.3—0.5% ） 液体培养基（无琼脂） 分类： 按用途分为： 基础培养基（肉汤、普通琼脂平板） 营养培养基（血平板、巧克力平板） 鉴别培养基（KIA、MIU培养基） 选择培养基（SS、高盐甘露醇平板） 增菌培养基（葡萄糖肉汤） 特殊培养基（厌氧培养基……） 1．基础培养基 含有基础生长所需的基本营养成分，最常用的是肉浸液，俗称肉汤（broth），主要成分含牛肉浸液和蛋白胨。 2．营养培养基（nutrient medium） 最常用的是血琼脂平板、巧克力血平板等 3．鉴别培养基（diferential medium） 糖发酵管、克氏双糖铁琼脂（KIA）、伊红-镁蓝琼脂和动力-吲哚-尿素（MIU）培养基等。 4．选择培 （selective medium） SS琼脂使致病的沙门菌、志贺菌容易分离到 5．特殊培养基 （special medium） 疱肉培养基、 巯基乙醇酸纳培养基 培养基的选择 根据标本来源和可能存在的病原菌，确定选用各种分离培养基。伊红美蓝/麦康凯用于筛选革兰阴性杆菌。 培养基的选择 从血液、骨髓中分离病原菌用血液增菌培养基 三、培养基的制备 （一）玻璃器皿灭菌前的准备 （二）培养基制备的一般程序 称量－溶化－调整pH值 －澄清过滤－高压灭菌 －分装－质量检查－保存 注意事项： 配置培养基必须在玻璃容器中进行； 溶解过程中先加水再加干粉； 尽量不加热溶解； 在室温下测定pH值； 分装过程注意无菌操作。 步骤： 称量：先盐，轻的先称； 溶化：先加蒸馏水，再加干粉，搅拌溶解； 调整pH值：pH试纸法； 澄清过滤：滤纸过滤，纱布加脱脂棉过滤; 高压灭菌： 121℃15min 分装:50℃左右时以无菌操作倾注于灭菌平皿内（内径9cm的平皿约15ml） 步骤： 质量检查：无菌试验 效果试验 保存：注明名称、制作日期置于4℃冰箱保存。 第二节 细菌的人工培养 目的：鉴定细菌的种类和保存菌种，为进一步确定细菌的致病性、药物敏感性提供依据。 一、无菌技术 概念： 要点： 二、细菌的接种与分离方法 （一）接种针和接种环 （二）接种罩和无菌室 （三）接种与分离技术 接种方法： 1、平板划线分离法 本法可使标本中混杂的多种细菌分散成单个细菌,在培养基表面各自生长繁殖形成单个细菌集团即菌落,以获得纯培养,为进一步鉴定细菌提供条件. 平板划线分离法: a.连续划线分离法 主要用于杂菌不多的标本分离 b.分区划线分离法 主要用于杂菌量较多的标本分离 接种方法 2、斜面接种法 主要用于单个菌落的纯培养、保存菌种或观察细菌的某些特性。用接种环（针）挑取单个菌落或培养物，从培养基斜面底部向上划一条直线，然后再从底部沿直线向上曲折连续划线，直至斜面近顶端处止。 接种方法 3、液体接种法 多用于一些液体生化试验管的接种。用接种环挑取单个菌落，倾斜液体培养管，在液面与管壁交界处研