实验十八贝类中有机氯残留测定方法.pptVIP

实验十四 贝类中有机氯残留测定方法 一、目的要求 1、测定海洋生物体贝类的有机氯 2、巩固和熟练掌握气相色谱仪的使用方法及功能 二、仪器设备与试剂 1．仪器设备和玻璃器皿 （1）气相色谱仪Agilent 6890（共用）。 其中色谱柱：HP-5弹性石英毛细管，长30m，内径0.32mm。监测 器：ECD。进样系统：带8盘位自动进样器；自动进样针：1μL （2）氮气、氢气和空气发生器（共用） （3）不锈钢解剖刀、电动高速组织捣碎机（共用） （4）KQ-100DE数控超声波清洗仪（昆山市超声仪器有限公司）（共用） （5）普通氮气钢瓶、吹氮仪 （共用） （6）1.5mL进样瓶1个、尖嘴吸管1支 （7）自动移液管（0.5、1.0和2mL）3支（共用） （8）聚四氟乙烯材料（生料带）若干 （9）30mL接液管1支 （10）玻璃分离柱（20cm×1.0cm）1 支 （11）离心管50mL（玻璃或塑料） （12）50mL 烧杯1个 2、试剂 （1）丙酮（色谱纯） （2）正已烷（色谱纯） (3) 丙酮：正已烷（1：2=V/V） (4) 丙酮：正已烷（3：10＝V/V） （5）无水硫酸钠 （6）硅藻土（60-100目） （7）中性氧化铝 （8）玻璃毛 三、实验步骤 1、样品预处理 采集的样品用现场海水洗净外表，擦去表壳水分，立即送回实验室冷冻。冷冻样品置于室温下解冻后，用不锈钢解剖刀插入，割断闭壳肌，撬开壳，取出软组织。翡翠贻贝去掉足丝和某些共生甲壳类。软组织样和组织液一并用电动高速组织捣碎机制成匀浆。 2. 层析柱的安装 取分离柱一支，按从下至上为玻璃毛、无水硫酸钠、中性氧化铝、佛罗里硅藻土、无水硫酸钠的顺序，分别填柱（试剂用量约2匙半）。填柱完毕，先用3 mL丙酮预淋洗，淋洗液弃去。 3. 萃取、过柱、浓缩 ① 称取绞碎样品10g于离心管中，加入无水硫酸钠适量（视样品含水量不同而不同，约2药匙）。 ② 加13 mL体积比为3：10的丙酮：正已烷，超声波萃取10min（超声频率：？超声功率90％，温度40℃），于3500 r/min下离心3min。上清液移入小烧杯中。 ③ 再加入5mL正已烷于离心管中，重复上述②超声萃取、离心步骤后，上清液并入小烧杯中， ④ 在离心管中加约3mL正已烷淋洗，离心，合并淋洗液，在烧杯中加入无水硫酸钠适量。 ⑤ 上清液过层析柱，用3mL的丙酮：正已烷溶剂（1：2）分3次淋洗，淋洗液全部并入接液管。 ⑥ 水浴50℃下用N2吹脱至约0.5mL，用正已烷定容至1mL，混匀备测。 4. 气相色谱分析 （1）色谱条件 气相色谱仪为Agilent 6890（详见实验十二的图1），毛细管色谱柱为HP-1弹性石英，长为30m，内径为0.32 mm。 柱箱程序升温：800C保持1min，以400C/min速率升温至1950C；以10C/min速率升温至2000C；以200C/min速率升温至2300C；以10C/min速率升温至235C；以200C/min速率升温至2500C，保持7min。进样口温度为240oC，检测器温度为300oC。载气N2的流速为1.8 mL/min，恒流控制。尾吹气40 mL/min。自动进样针清洗剂A、B均为正己烷，进样前A洗2次，进样后B洗5次，样品洗2次，泵洗5次。进样量1μL，不分流进样。 （2）色谱操作 详见实验十二的附录一《Agilent 6890气相色谱仪操作规程》。 四、定量分析 1、工作曲线的制备 本实验要求计算样品中的“六六六”和“DDT”含量，采用给定工作曲线法。准备方法如下： 用浓度为10mg/L的六六六和DDT标准储备液分别配制浓度分别为0、10、20、40、80、200μg/L的标准使用液各1mL。取1μL不分流进样，在上述选定的气相色谱条件下，进行分析。以峰面积对浓度做工作曲线，线性回归得到样品浓度与峰面积的线性方程。 2、样品含量的计算 ①六六六有四个同分异构体，用保留时间对样品中六六六的四个同分异构体进行定性，将各组分的峰面积之和代入六六六的工作曲线，进行定量计算。浓度的单位为μg/L。 ②DDT也有四个同分异构体，用保留时间对样品中DDT的四个同分异构体进行定性，将各组分的峰面积之和代入DDT的工作曲线，进行定量计算。浓度的单位为μg/L。 * *