1-1实验1-1--微生物培养基的配制和灭菌.pptVIP

实验 1-1（主要自学） 微生物培养基的配制和灭菌 一、实验目的 了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。 掌握加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。 二、实 验 原 理 1、培养基：是指由人工配制的、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物用的混合营养料。 2、培养基营养成分：碳源、氮源、无机盐、生长素以及水分等。 二、实 验 原 理 3、培养基的种类 （1）培养基按成分可分为：天然培养基、合成培养基和半合成培养基。 （2）按用途可分为：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基和选择培养基等。 （3）按物理状态可分为“固体培养基、半固体培养基和液体培养基 。 按照培养基的物理状态可分为 1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。 2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基。 3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。 二、实验原理 分装后，塞棉塞（胶塞），包扎，灭菌。（1）培养基的灭菌 ①常用的灭菌的方法有：干热灭菌、高压蒸汽灭菌、常压蒸汽灭菌、常压间歇式灭菌超高温灭菌、过滤除菌、辐射灭菌、化学药品灭菌等方法。 ②本实验培养基的灭菌常使用的是高压蒸汽灭菌，它是利用高温湿热空气使菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的。 1.按配方称取一定量的试剂、琼脂到250ml的 三角瓶中。 2. 加入100mL水。 3.塞上硅胶塞,用牛皮纸包扎好。 4.高压蒸汽灭菌。 5.灭菌后,当培养基冷却至50℃左右时,无菌倾注平皿(每100ml可制备5-6个平皿)。 6.凝固后放冰箱备用 。 （二）斜面培养基制作 1.称取一定量的营养琼脂到100ml的三角瓶中。 2. 加入100mL水。 3. 放入水浴锅内溶解。 4. 在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基， 【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞。 5.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌。 6.摆斜面,凝固后放冰箱备用。 半固体培养基制作 1.按牛肉膏蛋白胨半固体培养基配方称取相应成分到250ml的三角瓶中。 2. 加入100mL水。 3. 放入水浴锅内溶解。 4. 在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基， 【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞。 5.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌。 6.凝固后放冰箱备用。 牛肉膏蛋白胨—半固体培养基配方 牛肉膏: 0. 3g 蛋白胨: 1g NaCl: 0.5g 琼脂: 0.3g 水: 100ml pH: 7.0-7.2 放入水浴锅内溶解后,分装到试管中,灭菌备用。 液体培养基制作 1.按牛肉膏蛋白胨液体培养基配方称取相应成分到250ml的三角瓶中。 2. 加入100mL水。 3. 充分溶解。 4. 在空试管内倒入2～3mL已经溶解好的培养基，【注意尽量不要让培养基沾到试管口】塞好硅胶塞。 5.放入烧杯中,高压蒸汽灭菌。 6. 冷却后放冰箱备用。 牛肉膏蛋白胨液体培养基按下列配方及方法配制 牛肉膏: 0. 3g 蛋白胨: 1g NaCl: 0.5g 水: 100ml pH: 7.0-7.2 放入水浴锅内溶解后,分装到试管中,灭菌备用。 思考题 培养基配制完成后，为什么必须立即灭菌? 若不能及时灭菌应如何处理? 已灭菌的培养基如何进行无菌检查? * * 微生物培养基的配制和灭菌 营养物质的浓度要适宜 营养物质之间的配比要适宜 培养基的pH值、渗透压、水活度和氧化还原电势等物理化学条件要适宜。 3、培养基的种类 细菌： pH 7.0~8.0 放线菌：pH 7.5~8.5 酵母菌： pH 3.8~6.0 霉菌：pH 4.0~5.8 藻类： pH 6.0~7.0 原生动物： pH 6.0~8.0 初始pH 4、通常培养条件： 琼脂是最优良的凝固剂，自1880年开始用于配制微生物培养基以来，至今经久不衰。 5、凝固剂 细菌： 牛肉膏蛋白胨培养基； 放线菌：高氏1号合成培养基培养； 酵母菌：麦芽汁培养基； 霉菌： 查氏合成培养基； 二、实验原理 6、实验室的常用培养基 称量--配置--调节pH值--过滤--分装--灭菌 1.称量 按照培养基配方，准确称量各成份放于烧杯中。对于不是粉状（如肉膏），应用烧杯称量。 三、培养基配制的基本步骤 2.配调