04DNA纯度浓度分析.ppt

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2017-07-29 发布于河南
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04DNA纯度浓度分析

实验四 DNA的纯度、浓度分析 ;1、实验目的：结合琼脂糖凝胶技术与紫外分光光度法检测基因组DNA的纯度、浓度，分析DNA质量。学习使用核酸蛋白定量仪 ;2、实验原理：（1）DNA浓度测定 DNA或RNA在260nm处有最大的吸收峰。因此，可用260nm波长进行分光测定DNA或RNA浓度，OD值为1相当于大约50μg/ml的双链DNA、40μg/ml的单链DNA或RNA、33μg/ml的单链寡核苷酸。如用1cm光径，用H2O或TE稀释DNA样品若干倍并以H2O或TE为空白对照，根据读出的OD260值即可计算出样品稀释前的浓度： DNA含量（ug/ul）=50×OD260读数×稀释倍数/1000;（2）DNA纯度测定 DNA纯品的OD260/OD280为1.8，RNA为2.0，因此根据OD260/OD280的比值可估计DNA或RNA的纯度。根据经验，当样品的OD260/OD280为1.8－2.0左右时，即认为已达到所要求的纯度。若比值较高说明含有RNA或RNA降解，比值较低说明有残余蛋白质甚至酚等存在，不能准确定量???