原创力文档- 1、本文档共57页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
- 5、该文档为VIP文档，如果想要下载，成为VIP会员后，下载免费。
- 6、成为VIP后，下载本文档将扣除1次下载权益。下载后，不支持退款、换文档。如有疑问请联系我们。
- 7、成为VIP后，您将拥有八大权益，权益包括：VIP文档下载权益、阅读免打扰、文档格式转换、高级专利检索、专属身份标志、高级客服、多端互通、版权登记。
- 8、VIP文档为合作方或网友上传，每下载1次， 网站将根据用户上传文档的质量评分、类型等，对文档贡献者给予高额补贴、流量扶持。如果你也想贡献VIP文档。上传文档
查看更多
动态细胞因子检测
--ELISPOT技术原理及应用
达科为生物工程有限公司
研发部 周 翔
2016.4
ELISPOT原理
•酶联免疫斑点检测 ：Enzyme-Linked ImmunoSpot Assay,
ELISPOT
•细胞培养+刺激物
• “酶联免疫” ：基于酶促反应放大效应的免疫学检测。
• “斑点” ：沉积在固体基板上的有色斑点。
一个斑点对应一个细胞 ！
ELISPOT操作过程
动画演示
1 包被：将包被抗体/抗原包被到PVDF膜板上;
2 细胞孵育;
3 靶细胞活化分泌细胞因子/抗体;
4 移除靶细胞，加入检测抗体或生物素化抗体捕获分泌细胞因子/抗体;
5 加入酶标二抗或酶标亲和素 （HRP、ALP）;
6 显色，斑点形成;
ELISPOT基础假设
• 大小40-200 μm
斑
点
频
率
斑点核晕结构形成的原理
20 40 60 80 100 120 140 160 180 200 220
斑 点 直 径 （um ）
斑 点 直 径 （单位：微米）
ELISPOT技术优势
动态的免疫检测--斑点代表分泌细胞在一段时间内的动态，即
“Footprint”
（特异性刺激物+群体中特异性细胞）
灵敏度高 ：1个/40万细胞
单细胞水平
功能性检测
实现高通量检测
直观，可信度高
检测成本低
细胞因子分泌细胞 抗体分泌细胞
(T cells) (B cells)
ELISPOT简史
• 1983年, 澳大利亚人Czerkinsky和瑞典人 Sedgwick
受ELISA技术启迪，同时独立发明ELISPOT技术 ：计
数分泌抗体的 B 细胞个数
• 1985年，硝酸纤维素膜NC膜，改进显色底物，不再
需要琼脂糖凝胶。
• 1988年，Czerkinsky et.al.: 首次将应用扩展到细
胞因子检测领域，T cell IFN- γ; 同年出现双色标
记技术 ；
• 1993年，首次将PVDF膜板引入ELISPOT
• 1995年, 扫描技术的分析仪
文档评论（0）