中国水仙MADS—box基因克隆及其序列分析.pdfVIP

安徽农学通报 ，AnhuiA ．Sci．Bul1．2008，14(21) 47 中国水仙 MADS—box基因克隆及其序列分析 鞠玉栋 郑回勇 吴维坚 陈永快 何炎森 吴松海 (福建省农业科学院甘蔗研究所，福建漳州 363005) 摘 要：采用同源克隆方法首次克隆 了一条 中国水仙 MADS—box基 因，命名为 NtMADS。该基 因长599bp．编码 199AA，具有植物MADS—box基 因特有的典型结构 MADS—box和K—box。 关键词 ：中国水仙；花发育；基 因克隆；序列分析 中图分类号 Q331．8 文献标识码 A 文章编号 1007—7731(2008)21—47—02 Cloning and Sequence Analysisofa MADS ——box Homologous Gene from Narcissus tazetta var．ch 口，l JuYudongeta1． (FujianAcademyofAgriculturalSciencesSugarcaneResearchInstitue，363005) Abstract：A MADS—boxgenenamedNtMADSwasfirstclonedfrom Narciss tazettavar．chinesisRoem．Sequencecompari— sonandhomologyanalysisindicatedthattheNtMADSwashighlyhomologoustoMADS—boxgenefamily．Thesequenceof NtMADSgeneis599bpinlength，whichencodes199aminoacids．ThededucedpeptidecontainsaconservativeMADSdo． mainandaserei—conservativeK domain． Keywords：NarcissustazettayaF．chinesisRoem ；flowerdevelopment；MADS—box；cloning 植物花发育过程是一系列基因受 内外因子按时空顺 品；其它试剂均为国产分析纯 。 序表达的结果。通过对模式植物拟南芥和金鱼草花同源 1．3 方法 异形突变体的分离和研究，克隆了一系列调控花发育的同 1．3．1 RNA制备与检测 采用大连宝生物工程公司生 源异形基因，人们提 出了花发育的ABC模型 。J。该模 产的总RNA提取试剂 RNAisoReagent提取中国水仙花蕾 型指出A类基因控制萼片的形成；A类和B类基因共 同控 总 RNA，通过测定总 RNA样品A260／A280比值和甲醛变 制花瓣的形成；B类基因和 c类基因共 同控制雄蕊的形 性的 1．5％琼脂糖凝胶电泳 检测其浓度和完整性 。 成；C类基因控制心皮的形成。这三类基因均包含一个高 1．3．2 引物 根据 Yao等 设计 的一对 PI基因简并引 度保守的MADS结构域，属于MADS—box基因家族，编码 物序列提交大连宝生物工程公司合成引物，P1：5’一CG． 转录因子。随后人们又提出了ABCD模型 和ABCDE模 GAATTCATGGGNMGNGGNAARRT 一 3 ’，P2： 5 ’ 一 型。。，进一步丰富和完善了ABC模型。 CGCTCGAGGATCCGGYTGNATNGGYTGNAC一3’。 中国水仙 (Narcissustazettavar．chinesisRoem)为石蒜 1．3．3 cDNA第一链合成 参考大连宝生物工程公司的 科多花水仙属的一个变种，是多年生草本植物，是我国传 3’一FULLRACECoreSetVERSION 0试剂盒的说明，以 统十大名花之一，具有重要的观赏价值和经济价值。但 由