不同转染方法对荧光蛋白质粒转染人胚肾293T细胞影响的实验研究.pdfVIP

中国临床医学 2008年 1()月 第 15卷 第 5期 ClinicalMedicalJournalofChina，2008．Vo1．15，No．5 699 不同转染方法对荧光蛋白质粒转染人胚肾 293T细胞影响的实验研究 郑 颖 王文平 金正吉 赵奕文! 王建军 摘要 目的：探讨荧光蛋白质粒转染人胚 肾293T细胞 的最佳转染方法。方法 ：以脂质体转染法、超声辐照法、微泡造影剂 SonoVue联合超声辐照及脂质体中加入微泡造影剂 SonoVue并予以超声辐照4种转染方法，将含有绿色荧光蛋 白报告基 因 的真核表达质粒 pEGFP—N1转染人胚 肾293T细胞 ，48h后以荧光显微镜观察 293T细胞 中的绿色荧光蛋 白表达情况并用流 式细胞仪测算转染率。结果：脂质体 +SonoVue+超声辐照法的转染效果最好(23．／0±2．11 )。脂质体 +SonoVue+超声辐 照法的转染率分别与脂质体转染法、超声辐照法、微泡造影剂 SonoVue联合超声辐照法的转染率比较均有显著差异 (P 0．01)。结论 ：脂质体 中加入微泡造影剂 SonoVue并予以超声辐 照能显著提高荧光蛋 白质粒在人胚 肾293T细胞 中的转染效 果 。 关键词 脂质体 ； 超声； 微泡造影剂； 基 因转染 中图分类号 Q78 文献标识码 A VitroEmpiricalStudyofpEGFPTransfection intoHumanEmbryoKidneyCell293TbyDifferentTransfecti— cionMethods ZHENGYing、 WANGWenping JIN ZhengJi2 ZHAOYizz,en2 WANG Janjun3 1．DepartmentofUltrasound，ZhongshanHospital，FudanUniversity，Shanghai 200032；2．Depart— mentofUltrasound，XuhuiDistictCentralHospital，Shanghai 200031；3．DepartmentofGynaecology andObstetrics，TongjiHospital，TongjiUniversity，Shanghai 200065 Abstract Objective：ToexploreabettermethodtOtransferpEGFPintohumanembryokidney293Tcells．Methods：Thecul— tured293T cellsweredividedinto5groups：thefirstgroupwascontrolgroup，thesecondgroupwasgivenliposomewithplas— midpEGFP—N1，thethirdgroupwasexposedwithultrasound，theforthgroupwasexposedwith ultrasound andmicrobubble contrastagentSonoVue，thefifthgroupwasbothgivenliposomeandSonoVuethenexposedwithultrasound．Theexpression ofpEGFPwerestudiedbyfluorescencemicroscopeandthetransfectionefficiencywerecalculatedbyflow cytometryafter48 hours．Results：Thefifthgrouphasthebesteffect(23．10±2．11 )andhassignificantdifferencecomparedwithothergroups (P 0．01)．Conclusion：Ultrasoundandmicrobubblecontrastmedium SonoVuecanimprovetransfectionefficiencywithlipo— someintohumanembryokidney293T cells． KeyW ords Liposome； Ultrasound； Microbubbleconstrastmedium； Genetransfection 基因治疗中的一个难点是 目标基 因转染细胞的 1．1 材料与试剂 人胚肾293T细胞 (由中科院上 效率较低