4第四章5酶探究.ppt

本章小结 一、酶 酶的概念 酶催化作用的特点 共性 特性：条件温和、高效率、专一性、易变敏感性 二、酶的化学本质及结构功能特点 酶： 单纯酶 结合酶：全酶 = 酶蛋白 + 辅因子 酶的辅因子 维生素和辅酶 维生素是机体维持正常生命活动所必不可少的一类小分子有机物质。 维生素一般习惯分为脂溶性和水溶性两大类。 辅酶是一类具有特殊化学结构和功能的化合物。参与的酶促反应主要为氧化-还原反应或基团转移反应。 大多数辅酶的前体主要是水溶性 B 族维生素。许多维生素的生理功能与辅酶的作用密切相关。 酶结构与功能特点 (1)活性中心：结合部位、催化部位、调控部位 (2)必须基团 (3)酶原和酶原的激活 (4)同功酶 三、酶的分类及命名 四、酶作用的机制 1.酶催化作用的本质：降低反应活化能 2.酶催化作用的中间产（络合）物学说 E + S ==== E-S ??? P + E 3.酶与底物结合形成中间络合物的方式：锁钥假说、诱导契合假说 4. 使酶具有高效催化的因素 临近定向效应 “张力”和“形变” 酸碱催化 共价催化 五、酶促反应的速度及其影响因素 1.底物浓度对酶促反应速度的影响 米氏方程 米氏常数Km的意义:米氏常数是反应速度为最大值的一半时的底物浓度。米氏常数的单位为mol/L。 Km值表示酶与底物之间的亲和程度：Km值大表示亲和程度小，酶的催化活性低; Km值小表示亲和程度大,酶的催化活性高。 2.抑制剂对酶反应的影响 抑制作用的类型： 不可逆抑制作用 可逆抑制作用 竞争性抑制 非竞争性抑制 反竞争性抑制 a b c 3.激活剂对酶反应的影响：提高酶活力 4.酶浓度对酶反应的影响: 5.温度对酶反应的影响:最适温度 6.pH对酶反应的影响：最适pH 7.酶的别构（变构）效应 别构酶的特点： 一般是寡聚酶 具有别构效应 反应速度和底物浓度关系不符合米曼方程双曲线 8.固定化酶 六、酶的分离纯化与酶活力测定 1.酶的分离纯化 基本原则：提取过程中避免酶变性而失去活性 基本操作程序： 选材 抽提 分离 纯化 酶的制剂形式与保存 2.酶活力的测定 概念 酶活力：又称为酶活性，一般把酶催化一定化学反应的能力称为酶活力，通常以在一定条件下酶所催化的化学反应速度来表示。 酶活力测定就是测定一定量的酶，在单位时间内产物(P)的生成（增加）量或底物（S）的消耗（减少）量。即测定时确定三种量：①加入一定量的酶；②一定时间间隔；③物质的增减量。 测定酶活力常有以下几种方法 初速度法 平均速度法 动态连续测定法 快速反应追踪法 测酶活所用的反应条件应该是最适条件 酶活力测定方法： 反应计时 反应量的测定：根据被测定物质的物理化学性质通过定量 分析法测定。常用的方法有：光谱分析法、化学法和放射性化学法。 3.酶活力的表示方法及计算 酶活力单位的基本定义为：规定条件（最适条件）下一定时间内催化完成一定化学反应量所需的酶量。 国际单位： “U” 和 “Kat” 习惯单位 比活力：酶的比活力是每单位（一般是mg）蛋白质中的酶活力单位数（如：酶单位/mg蛋白）。 回收率=某纯化操作后的总活力/某纯化操作前的总活力 本章作业 1、什么是酶？它作为生物催化剂的特点有哪些？最主要特点是什么？ 2、何谓全酶？酶的辅助因素包括哪些？说明全酶各部分的作用。 3、酶的化学本质是什么？如何证明？ 4、解释酶活性部位、必需基团及二者之间的关系。 5、什么是酶的活性部位与别构部位？二者有何区别？ 6、什么是酶原的激活？其实质是什么？酶原的生物学意义？ 7、解释：同工酶、抗体酶、多酶体系、调节剂、酶的专一性 8、说明酶催化作用的本质。 9、说明米氏方程及Km值的意义。 10、何谓竞争性和非竞争性抑制作用。 11、影响酶促反应的因素有哪些？简述其影响机理。 12、什么是酶活力、比活力？测定酶活力时应注意什么？ 13、酶的国际单位有几种表示方法？ 14、什么是固定化酶？有何优点？举例说明它在实际生产中的应用。 15、什么是别构酶？它的动力学方程的特点如何？ 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 影响最适温度（T0）的因素， T0的特点 1、是一个有条件的特征常数，受底物种类、作用时间等影响。[S]越大T0常越大，因为底物对酶有保护作用。 2、水分活度的影响：酶在干燥状态较之潮湿状态下对温度的耐受力越