2.2.2_动物细胞融合与单克隆抗体·探究.ppt

欢迎走进现代生物科技专题课堂细@胞@工@程 新化上梅中学 康力杰 植物组织培养 VS 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞的增殖 培养基 （半）固体、营养、植物激素 液体、营养、 动物血清 结果 培养成植株 培育成细胞系（株） 培养目的 快速繁殖， 培育无病毒植株。 获得细胞的产物等 思考：植物细胞工程中，除了植物组织培养技术外，还有什么技术？过程如何？ 动物细胞培养 温故而知新——植物细胞杂交（马铃薯番茄） 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 植物体细胞的杂交 杂种细胞AB 杂种植株 脱分化 愈伤组织 再分化 植物组织培养 原生质体B 原生质体A 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 植物细胞A 植物细胞B 动物细胞可以融合吗？ 如果可以，两者相同吗？ 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。） 3、温度和PH 36.5 +0.5度 ；PH为7.2-7.4。 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 补充合成培养基中缺乏的物质 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 单个细胞 加培养液 （分解弹性纤维） 胰蛋白酶 剪碎 细胞株 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质已改变 带着问题走进课堂？ 2.2 动物细胞工程 自主阅读，p52第2自然段，思考下列问题： 1、什么叫动物细胞融合 cell fusion？ （概念要点） 两个细胞正在融合 受精作用 ① 两个或多个动物细胞 ② 一个细胞（杂交单核细胞） 2、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？两者的融合过程是否也一样？ 诱导细胞融合物质： 诱导剂：仙台病毒、聚乙二醇PEG诱导细胞融合的仙台病毒必须灭活。 思考讨论：为什么细胞融合过程中使用的病毒需要灭活？不灭活行吗？ 因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂 质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合，不灭 活的话会感染细胞，而不能诱导细胞融合。 植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 细胞融合原理 细胞融合的方法 诱导方法 用途 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 去除细胞壁后诱导原生质体融合 使细胞分散后诱导细胞融合 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 3、动物细胞融合技术的发展简史告诉我们：科学技术是不断发展的。那么，实现动物细胞融合有什么意义呢？ 打破生殖隔离，使远缘杂交成为可能； 广泛应用多个学科领域； 重要用途：制备单克隆抗体。 1、抗体 1.1 概念： 抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白 Ig。 1.2 来源： B淋巴细胞。 B淋巴细胞与抗体的关系： 　１．B淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。 　２．动物体内的B淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性免疫作用。 　３．每一个淋巴细胞只能产生一种抗体。 自主阅读P52：传统的抗体的生产方法及 缺陷是什么？怎样解决这个问题？ 2、单克隆抗体McAb（概念） 由单个B淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。 特点：特异性强、灵敏度高、 纯 度 高、产 量 大。 如何大量生产单克隆抗体？ 利用淋巴细胞产生抗体的功能 利用肿瘤细胞无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和肿瘤细胞特性的杂交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞 如何筛选？ 融合方式？ 生产单克隆抗体需要那些物质和技术呢？ 3、单克隆抗体McAb制备过程 专一抗体检验阳性 单克隆抗体 注射抗原 B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 细胞融合 杂交瘤细胞 细胞培养 筛选，继续培养 足够数量的、能产生特定抗体的细胞群 体外培养 注射到小鼠腹腔 筛选 创始人：米尔斯坦 思考问题： 1、本过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 2、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 4、单克隆抗体的应用 与常规抗体相比，单克隆抗体产量高，特异性强，灵敏度高，优越性十分明显。 应用主要有： 1、临床诊断、治疗疾病。 2、作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤。 课堂小结 动物细胞融合过程 单克隆抗