《现代组织化学》组织化学.ppt

* * * 现代组织化学技术 1、经典组织化学 2、免疫组织化学 3、原位杂交组织化学 现代组织化学的内容 组 织 化 学 (也称细胞化学) （Histochemistry or cytochemistry） 一、组织化学的基本概念 （一）组织化学的提出 （二）组织化学的定义 在保持组织或细胞基本上不改变其生活状 态时的微细结构的条件下，采用显微镜技术观 察某些化学成分或酶活性在组织或细胞内的定 性、定位和定量及其变化规律 定性，定位， 定量; 组织原位，显微镜 铅法（ATP酶） H-E染色 醛复红染色 H-E染色 （三）组织化学的基本原理 化学反应 化学试剂 + 拟检物质 反应产物沉淀（有色） （组织切片或细胞涂片） （拟检物质所在处） 一、组织化学的基本概念 （四）组织化学技术的用途 一、组织化学的基本概念 1. 某些离子: 钙离子、铁离子、磷酸根离子等 2. 糖类: 过碘酸希父反应（PAS反应）可以显示多糖和糖蛋白的糖链 糖 多醛 紫红色反应产物 过碘酸 品红硫酸复合物 无色，即希夫试剂 （四）组织化学技术的用途 一、组织化学的基本概念 3. 脂类: 甲醛固定，冰冻切片，用油红O、尼罗蓝或苏丹类脂溶性染料染色，可呈现相应颜色 4. 核酸: DNA显示：福尔根反应——稀盐酸水解DNA，再用希夫试剂处理，形成紫红色产物 DNA和RNA同时显示：甲基绿---派若宁 儿茶酚胺、蛋白质、氨基酸等等 5. 酶类: 通过显示酶的活性来检测酶的存在。 常用光镜酶组织化学 显示法反应原理 酶组织化学基本反应原理 酶特异性底物 + 相关捕获剂 反应产物沉淀（有色） 反应产物沉淀（无色）+置换剂 酶 （孵育液内） （组织细胞内） 镜下观察 有色沉淀 R-PO4Na2 + H2O R-OH + CaHPO4 CaHPO4 Co3(PO4) 2 Co3(PO4) 2 CoS ↓（显色） 1、金属-金属盐显示法 方法Ⅰ：钙-钴法 CaCl2 酶作用 Co(NO3)2 (NH4)2S （无色沉淀） 1、金属-金属盐显示法 方法Ⅱ：铅法 R-PO4Na2 + H2O R-OH + PbHPO4 PbHPO4 PbS ↓（显色） 酶作用 Pb2+ (NH4)2S 2、偶联偶氮色素法 I、同时偶联法： 该法是孵育液中的底物被酶分解后所产生的 反应物沉淀立即与重氮盐形成重氮化合物的偶氮 色素而显色。 II、后偶联法： 该法是为了防止重氮盐对酶的抑制作用，而 先使酶作用于底物，使其分解产生反应物沉淀， 然后将其浸渍于重氮盐溶液中，使其形成偶氮色 素而显色。 OPO2Ca OH OH N≡N Cl β-磷酸萘酚 α-萘基氯化重氮盐 不溶性偶氮色素 N=N OH 酶作用 + 3、色素形成法 I、四唑盐法 是指在孵育液中含有四唑盐或双四唑盐的酶作用底物，在脱氢酶的作用下，酶作用底物分离出氢原子，形成红色或蓝色的色素，即甲月朁（càn） 或二甲月朁 ，它们沉着在酶作用部位，即酶的定位。 C6H5—C N—N—C6H5 N＝N—C6H5 酶作用 +2H C6H5—C N—NH—C6H5 N＝N—C6H5 + HCl 四唑盐(无色) 甲月朁 （红色） 3、色素形成法 II、靛酚蓝法： H3C CH3 N N H3C CH3 N NH2 OH + 酶作用 + 2H2O 二甲基–对–苯二胺 ?-萘酚 靛酚 几种酶的反应原理 酸性磷酸酶 碱性磷酸酶 三磷酸腺苷酶 乙酰胆碱酯酶