非基因型雌激素膜性受体GPR30 在生后雌性大鼠海马内的发育学表达.PDF

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2009, 36(1): 103~ 107 基因型雌激素膜性受体GPR30 在生后雌性大鼠 海马内的发育学表达与亚细胞水平定位研究* 2) 1) 1) 1)** 1)** 赵承军 邓其跃 张东梅 蔡文琴 张吉强 (1) 三军医大学神经生物学教研室，重庆市神经科学研究所，重庆400038; 2) 宁夏医科大学组织学与胚胎学教研室，银川750004) 摘要 为了研究非基因型雌激素膜性受体GPR30 对海马的结构和功能的调节作用，应用硫酸镍铵增强显色的免疫组化技术 以及酶标免疫电镜技术，观察了生后雌性大鼠海马内GPR30 表达的变化及其免疫阳性产物在神经元亚细胞水平的定位情 结果显示，GPR30 免疫阳性产物主要位于海马CA 区的锥体层神经元与齿状回颗粒层的神经元内，其表达水平随发育呈 增加趋势 P0 时在雌性大鼠海马未发现明显GPR30 免疫阳性反应，P7 后免疫阳性物质开始在CA2 出现，P14 时见于CA1 、 CA2 和齿状回，P30 和P60 主要见于CA1 、CA2、CA3 和齿状回 在光镜下，GPR30 免疫阳性产物位于细胞核外的胞浆中， 细胞核未见免疫阳性反应 在透射电镜下可见其位于神经元的胞浆内，可能主要是粗面内质网，也可见于线粒体和细胞膜 以上结果证实，GPR30 是一种位于细胞核外的、非基因型作用的雌激素受体，可能参与了雌激素对海马锥体神经元突触可 塑性和学习记忆等功能的调节，还可能参与了对齿状回成年神经干细胞某些活动的调节 关键词 海马，雌激素膜性受体，GPR30，免疫组化，免疫电镜 + 学科分类号 Q421，R338.6，R338.2 6 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2008.00207 已有的研究表明，雌激素通过其经典的核受体 间期者用于实验 P0、P7 、P 14、P30 和P60 各6 ER - 和ER-茁 对脑的发育、学习记忆、认知、 只用于免疫组化研究；另选P60 鼠6 只用于免疫电 情绪等高级脑功能在基因水平(genomic)发挥着十 镜研究，设实验组 3 只和不加一抗的对照组各 分重要的调节作用[1～3] 近年的研究发现，雌激素 3 只 还存在非基因型(non-genomic) 的调节途径，该作用 1 2 主要试剂和药品 可能是由雌激素的第三种受体 膜性受体GPR30 兔抗 GPR30 多克隆抗体(ab12563) 购 自英国 介导的 目前仅有一篇文献报道了GPR30 在啮齿 Abcam 公司；抗体稀释液(antibody diluents with [4] background-reducing, S302281) 与羊抗兔EnVisionTM 动物脑内的表达情 ，但它在海马发育过程中表 达的变化尚未见报道，而且它在亚细胞水平的定位 试剂盒 (GK400305) 购自 Dakocytomation (DAKO 也还存在不同的研究结果 本实验采用免疫组化技 Co., USA) ；封闭血清、DAB 显色试剂盒等购自北 术与酶标免疫电镜技术，对GPR30 在生后不同发 京中杉公司；其余试剂均为市售分析纯 育阶段大鼠海马内的表达及其免疫阳性产物在神经 1 3 动物固定、取材 元内的定位进行了初步研究，以期为深入研究雌激 动物用5%水合氯醛麻醉，开胸，经左心室插 素对学习记忆等高级脑功能的调节提供新的基础 管到主动脉，剪开右心耳，先后灌注生理盐水 资料 1 材料与方法 * 第三军医大学回国人员启动基金(TMMU, 2007XG4 1)和重庆市回