分解尿素的细菌概要1.ppt

课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题二 微生物的培养与应用 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 3、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌 二.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 二、研究思路 (一)筛选菌种 1 实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 PCR技术：要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 启示：自然界中寻找目的菌种时要根据它对_______________，到相应的环境中去寻找。 生存环境的要求 耐高温的酶 耐高温生物体 耐高温环境（热泉、火山口） 寻找 寻找 Taq细菌 筛选原因: 因为热泉的高温条件淘汰了绝大多数微生物，耐热的Taq细菌保留下来。 （一）、筛选菌种 1.自然界中目的菌株的筛选 (1)依据:根据它对 的要求,到相应的环境中去 寻找。 (2)实例:PCR技术中用到的耐高温的 ,就是从热泉中筛选出来的Taq细菌中分离到的。 2.实验室中目的菌株的筛选 (1)理论依据 人为提供有利于 生长的条件(包括 、温度、pH等),同时 或 其他微生物生长。 生存环境 Taq DNA聚合酶 目的菌株 营养 抑制 阻止 2）实例:(本课题使用的培养基） ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 ② 该培养基的配方中，为微生物的生长提供碳源和氮源的分别是什么物质？ 固体培养基 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 此配方能否筛选出产生脲酶的细菌？为什么？ 原则上能。只有产生脲酶的细菌能利用尿素作为氮源而生存。 3 选择培养基： 在微生物学中，将允许______________________，同时_________________________生长的培养基。 特定种类的微生物生长 抑制或阻止其他种类微生物 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板等方法对它进行纯化培养分离。 ㈡.统计菌落数目： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 1个菌落←1个活菌 2原理： 在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。 1常用方法： 稀释涂布平板法。 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 方法：稀释涂布平板法、显微镜直接计数法， 还可以用过滤膜法 3计算公式： 4 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平板上，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 原因： 当两个或多个细菌连在一起，平板上只观察到一个菌落。 看课本P22，并讨论你认为这两位同学的作法正确吗？如果有问题，错在哪？ 第一位同学：没有重复实验（至少涂布3个平板） 第二位同学：A组结果误差过大，不应用于计算平均值 实例分析P22 第一同学只涂布了一个平板，没有设置重复组，因此结果不具有说服力。 第二位同学考虑到设置重复组的问题，涂布了三个平板，但是其中1个平板的计数结果与2个相差太远，说明在操作过程中可能出现了错误，因此，不能简单地将3个平板的计数值用来求平均值。 计算公式： 每克样品中的菌株数 =（C÷V）×M 某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得 平板上菌落数的平均数为234，那么每克样 品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液 的体积为0.1ml） ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 1对照实验: ㈢.设置对照： 2.目的: 是指除了被测试条件以外，其他条件都相同的实验。 排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌 落数目的实验时，A同学从对应的106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌 落，但是其他同学在同样的稀释度下 只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同，