第八章 环境中微生物的检测.doc

第八章 环境中微生物的检测 第一节?? 空气中的微生物 ? 空气的生态条件——不适合微生物生长繁殖。（营养不足、紫外线照射、水分少）。 一、空气微生物的来源 ????? 空气中的微生物主要来自土壤飞起来的灰尘、水面吹起的水滴、生物体体表脱落的物质、人和动物的排泄物等。 二、空气中微生物的数量和分布 ??? 空气中的微生物大部分是腐生的种类，但是不同的空气环境中微生物的种类不同。有些种类是普遍存在的，如某些霉菌、酵母菌、真菌孢子。细菌主要是来自于土壤的腐生性种类，常见的为各种球菌、芽孢杆菌、产色素细菌等。 ??? 空气中微生物的分布随环境条件及微生物的抵抗力不同而呈现不同的分布规律。空气中微生物的数目决定于尘埃的总量。空气中尘埃含量越高，微生物的种类数量越多。 三、空气微生物的卫生标准 ??? 室内空气污染的指标：＞500～1000个/m3。 四、空气中微生物的检测方法 ????????? 常用的检验方法是沉降平板法，即测定在一定时间内从空气中降落到单位面积地面上的微生物个数。操作过程如下： ????????? 将融化的营养琼脂培养基倒入d90mm无菌培养皿中制成平板。均匀布设在待测处地板上（一般最少设5个待测点），打开皿盖5～10min，让空气中的微生物降落在平板表面，盖好皿盖，然后倒置放入培养箱中，在37℃条件下培养48h后计菌落数。 ????????? ????????? 式中：C——空气细菌数；（个/m3） ??????? N——菌落数（个）； ??????? A——平皿底面积（㎝2）； ??????? t――暴露时间（min）。 ????????? 目前，我国还没有统一的空气卫生标准，一般以室内1m3空气中细菌总数在500～1000以上作为污染指标。 ? 第二节 细菌总数的测定 一、定义 细菌总数：细菌总数是将定量水样（原水样或作一定稀释后水样1mL）接种在普通营养琼脂培养基内，于37℃培养24h后观察结果，计数其上长出的细菌菌落数，然后换算求出原水样每mL中所含的细菌数。 二、细菌总数测定的评价标准 我国生活饮用水标准（GB5749-85）规定，细菌总数不得超过100个/ml。 一般认为在天然水体中，如10～100个/mL，为极清洁的水；100～1000个/mL，为清洁的水；1000～10000个/mL，为不太清洁的水；10000～100000个/mL，为不清洁的水；大于100000个/mL，为极不清洁的水。 三、细菌总数的测定方法 1、水样的采集和处理 （1）自来水的采集 （2）河湖水、井水、海水和其他水样的采集 2、水源水或其他污染水体细菌总数的测定方法 （1）稀释 环境要求：琼脂平板在工作台暴露15分钟，每个平板不得超过15个菌落。 代表性：取固体样品时需多采几个部位，且经过均质或研磨； ?????????? 液体样品须经过振摇，以获得均匀稀释液。 减少误差：每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管，将吸管内液体沿管壁流入， ???????????? 勿使吸管尖端伸入稀释液内，并且稀释液应充分振摇。 （2）接种 ? （3）无菌操作倒培养基 ? （4）培养 包扎后，倒置于培养箱中，在适宜的温度下培养相应的时间（细菌在37℃下培养1d～2d、放线菌和真菌则在28℃下培养5d～7d）。 （5） 计数 计数时间：到达规定培养时间，应立即计数。如果不能立即计数，应将平板放 ????????? ??置于0－4℃，但不得超过24h。 计平皿中菌落数：肉眼观察，必要时用放大镜检查。记下各平板的菌落总数，求出同稀 ??????????????? ??释度的各平板平均菌落数。 规律：不同稀释度的菌落数应与稀释倍数成反比（同一稀释度的二个平板的菌落 ????? ??数应基本接近），即稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈? ?????? ?多。如出现逆反现象，则应视为检验中的差错（有的食品有时可能出现逆反现 ???? ???象，如酸性饮料等），不应作为检样计数报告的依据。 （6）报告方法 （7）菌落总数报告方式 ???? 菌落数的报告，按国家标准方法规定菌落数在1~100时，按实有数字报告，如大于100时，则报告前面两位有效数字，第三位数按四舍五入计算。为了缩短数字后面的零位，可用10的指数来表示。??? 固体检样以克（g)为单位报告，液体检样以毫升（mL）为单位报告，表面涂擦则以平方厘米（cm2）报告。第三节 总大肠菌群的测定 一、自来水测定 1、初步发酵实验 方法：在2个含有50mL三倍浓缩蛋白胨发酵管(或瓶)中，各加入100mL水样，在10支含有5mL三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入10mL水样，混匀后，37℃培养24h，24h未产酸产气的继续培养至48h。 判断：若培养基颜色由红变黄（产酸），有产气现象或