分选流式细胞仪原理以及样本制备.pdf

FACSAria 流式细胞仪原理 及样本处理 张新梅 Karen_xinmei_zhang@ 流式细胞仪 它们有什么共同之处? 藻类细胞 染色体 血细胞 原生动物细胞 流式细胞仪如何了解细胞？  分析细胞  多种荧光素标记细胞  高灵敏度快速检测 流式细胞仪如何了解细胞？ Laser beam  分选细胞  从复杂的细胞群体中 得到高纯度的靶细胞, 进一步深入研究 流式细胞仪可告诉我们一个细胞的什 么指标?  细胞的相对大小（前向角散射光信号， FSC）  细胞的相对颗粒性及内部结构的复杂性 （侧向散射光信号，SSC ）  相关的荧光强度 散射光信号的特征  FSC和SSC  当颗粒通过聚集的激光束时，激光向各个方 向散射。与激光束方向同轴的称前向角散射 光信号（FSC）。与激光束垂直的称为侧向 角散色光信号（SSC）。  488nm激光激发产生散射光 散射光信号的特征 前向角散射光信号FSC 侧向角散射光信号SSC 散射光信号的特征  红细胞裂解的全血 荧光信号的特征  什么是荧光信号  当荧光抗体或其他染料染色的颗粒通过激光 束时，染料吸收光子跃迁到高能级，返回基 态时，染料释放出能量，大部分以光的形式 释放。这种发射出的光称为荧光。 荧光信号的特征  发射光的荧光强度与结合的位点成正比 直方图显示荧光信号 点图显示荧光信号 什么是流式细胞仪？  在流动的状态中检测细胞各种物理及生 物特征的一种仪器； Injector Tip Sheath fluid Fluorescence signals Focused laser beam 流式细胞仪的特征  灵敏度高  速度快  多参数分析（可同时标记多种荧光素）  单细胞水平上分析  可分析大量细胞  需要样本量少  出结果快  标本来源广：全血样本、骨髓、组织、培养细胞、 穿刺物、胸水、腹水、灌洗液、脑脊液、眼泪、乳 汁、血清/血浆、细胞裂解液 FACSAria结构 FACSAria结构  流式细胞仪  液流系统  将细胞引导至检测点  光学系统  产生并收集光学信号  电子系统  仪器开关及控制电路板的连接器  分选系统 液流系统  负责将待测颗粒从样本仓运送到流动室 的检测点，然后视需要，液流流入废液 桶或分选收集管。  鞘液  样本  流动室  喷嘴 液流系统  鞘液  原装鞘液，分选时，一定 要选PBS。  从软件上选择打开液流命 令，液流打开后，鞘液在