乙肝五项修改版.ppt

;目录; ;乙肝的传播途径 ;乙肝五项的概念;金标法 金标法乙肝两对半快速检测板是采用层析法检测乙肝病毒五项血清学标志HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb。 酶免法（ELISA法） ELISA可用于测定抗原，也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体，②酶标记的抗原或抗体，③酶作用的底物。 HBsAg、 HBeAg检测试纸条采用双抗体夹心法测抗原； HBsAb检测试纸条采用双抗原夹心法； HBeAb、HBcAb此两项在检测试纸条上采用了竞争抑制法。由于e抗原较核心抗原仅多29个氨基酸，e抗原很容易转变成核心抗原，因此HBcAb和HBeAb的测定均采用竞争法 ; ELISA法在临床实验室已得到普遍应用，特别是用于各种肝炎 标志物的检测，但ELISA法需时较长,其主要原因是由于液相中的抗原（抗 体）需经扩散才能与固相上的抗原或抗体反应。但作为基层医疗单位、急 诊病人和手术前的应急的单个标本检测，包括现在的血站的流动采血点献 血员的快速筛检是根本无法用ELISA法来实现的。20世纪70年代初，FANKL 等建立了免疫胶体金技术，开始作为一种免疫标记技术而被使用，随后逐 渐广泛应用于免疫检测技术。各种金标检测条，检测卡已被广泛使用。相 对而言，ELISA法检测准确性要高于金标法， 金标法检测限为1ng/ml,ELISA 法灵敏度为0.5ng/ml，国产ELISA法试剂最高灵敏度可达 0.1ng/ml。故在 实际应用中，根据实际情况两种方法联合起来，特别是 在大批量检测时可 用金标法作为初筛，这样可大量节约时间，更快速、准确为病人服务。;（1）将特异性抗体与固相载体连接，形成固相抗体：洗涤除去未结合的抗体及杂质。　　 （2）加受检标本：使之与固相抗体接触反应一段时间，让标本中的抗原与固相载体上的抗体结合，形成固相抗原复合物。洗涤除去其他未结合的物质。　　 （3）加酶标抗体：使固相免疫复合物上的抗原与酶标抗体结合。彻底洗涤未结合的酶标抗体。此时固相载体上带有的酶量与标本中受检物质的量正相关。　　 （4）加底物：夹心式复合物中的酶催化底物成为有色产物。根据颜色反应的程度进行该抗原的定性或定量。　　 ??据同样原理，将大分子抗原分别制备固相抗原和酶标抗原结合物，即可用双抗原夹心法测定标本中的抗体。; 双位点一步法即在双抗体夹心法基础上使用针对抗原分子上两个不同表位的单克隆抗体，分别作为固相抗体和酶标抗体。测定时将待检标本和酶标抗体同时加入进行反应，两种抗体互不干扰，经一次温育和洗涤后，即可加入底物进行显色测定。 钩状效应：双位点一步法中，如果待检测标本中抗原浓度过高，过量抗原则会分别与固相抗体和酶标抗体结合，而不再形成夹心复合物，类似于沉淀反应中抗原过剩的后带现象，所得结果将低于实际的含量，这种现象称之为钩状效应。 ;固相抗体 ;间接法检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。即将已知抗原吸附于固相载体上。待检标本中相应抗体与之结合，形成固相抗原-抗体复合物，再用酶标二抗与固相免疫复合物中的抗体结合，形成固相抗原-抗体-酶标二抗复合物，根据加底物后的显色程度确定待检抗体含量。;捕获法的原理是将抗人IgM抗体（抗人IgMμ链抗体）吸附于固相载体上，待检标本中的IgM类抗体多被固相抗体捕获。加入特异抗原与固相抗体捕获的IgM抗体结合，再加入抗原特异的酶标抗体，形成固相抗人IgM-IgM-抗原-酶标抗体复合物。最后根据加底物后的显色程度确定待检IgM抗体的含量。固相捕获法主要用于血清中IgM类抗体的测定。; 1、HBsAg(乙肝表面抗原) 它是乙肝病毒的外壳物质，本身没有传染性。它的阳性往往提示有完整的病毒颗粒存在。 2、抗一HBs(乙肝表面抗体，HbsAb) 它是HBV自然感染人恢复期出现的抗体，此时HBsAg自然消失了。它的存在提示人对乙肝有了抵抗力，不会再得乙型肝炎了。我国有27.42%的人口有此抗体。 3 、HBeAg(乙型肝炎e抗原) 它产生于病毒内部，可分泌血液中，e抗原阳性提示病毒有活动，乙肝病毒复制速度很快，而且是具有传染性的指标。 4 、抗～HBe(乙肝e抗体，HBeAb) 是人体针对e抗原产生的一种蛋白物质，阳性结果提示病毒的传染性变弱，病情已处于恢复阶段。但另一种情况可能是乙肝病毒发生了变异，此时血清中无HBeAg，但可产生抗一HBe，出现这种情况就需要查HBV—DNA来判定是否还有病毒存在。 5 、抗一HBc(乙肝核心抗体，HbcAb) 这种抗体分IgM和lgG两种：抗HBc—IgM阳性提示病毒活动，有传