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　　死亡受体5诱导Jurkat细胞凋亡的作用论文 【关键词】 细胞凋亡 Role of DR5 in TRAIL induced apoptosis of Jurkat cells 【Abstract】 AIM: To study the role of DR5 in TRAIL apoptotic signal transduction in Jurkat cells. METHODS: cDNA containing fulllength extracellular domain of human DR5 ologous rebination secreted high levels of sDR5. BALB/c mice munized Ab. The binding of antiDR5 mAb easured for surface expression of TRAIL receptor by floetric analysis. Jurkat cells ined by floetry. The rates of TRAILinduced apoptosis and antiDR5 mAb blocking on Jurkat cells etry Ab. The average percentage of blocking Ab can specifically bind to DR5 and DR5 is expressed at high levels on Jurkat cells. DR5 plays a very key role in TRAIL induced apoptosis in Jurkat cells. DR5 expression is important for the induction of apoptosis by TRAIL. 【Keyonoclonal 【摘要】 目的： 探讨DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用. 方法： 用含人全长DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB/c小鼠，制备抗DR5 mAb. 将96孔U型细胞培养板加1×105/孔Jurkat细胞和5 mg/L抗DR5 mAb，采用TRAIL试剂盒检测细胞凋亡率. 结果： 抗DR5 mAb与Jurkat细胞表面的DR5作用后，TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎被抗DR5 mAb完全阻断，阻断率高达90.49%. 结论： DR5在TRAL诱导的Jurkat细胞凋亡中起关键作用. 【关键词】 Jurkat细胞；TRAIL；细胞凋亡；DR5；抗体，单克隆 0引言 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand, TRAIL）是近几年新发现的TNF 超家族成员，TRAIL与其受体结合可以诱导大多数肿瘤细胞凋亡而对大多数正常细胞无影响. 已经发现，TRAIL有5种受体.freelAb阻断DR5的功能，并应用流式细胞仪检测TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡情况，以探讨DR5在TRAIL诱导肿瘤细胞凋亡中的作用. 1材料和方法 1.1材料 含有人DR5细胞外结构域全长cDNA的毕赤酵母表达载体菌株由美国宾夕法尼亚大学医学院病理医学实验室陈有海教授馈赠. Jurkat细胞为本室保存细胞株传代培养于含2.0 mmol/L L谷氨酰胺、1.5 g/L碳酸氢钠、10.0 mmol/L HEPES, 1.0 mmol/L丙酮酸钠、100.0 mL/L FBS, 1×105 U/L 青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基. DMEM/HAT和DMEM/HT选择培养基（Sigma公司）. TRAIL凋亡检测试剂盒（Upstate biotech）. FACSCalibur型流式细胞仪（美国BD公司）. 1.2方法 1.2.1抗DR5 mAb制备及特异性鉴定 1.2.1.1抗DR5 mAb制备参照文献［2］制备抗DR5 mAb. 抗DR5 mAb类型经ELISA法测定mAb的类型分别为IgG1(YM 366, YM 369)和IgM (YM 362, YM 363, YM 367 )，两者均可与sDR5结合，经流式细胞仪分析发现仅IgG能与Jurkat 细胞表面的DR5结合. 1.2.1.2流式细胞仪分析mAb与胞膜DR5结合取生长状态良好的Jurkat细胞，用含 50 g/L BSA 的PBS洗涤3次，计数细胞，取1×105细胞与杂交瘤细胞培养上清100 μL混合，冰浴反应30 min. 预冷PBS洗涤细胞3次，然后每孔加1 μL FITC标记的山羊抗小鼠IgG或IgM（Ja