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黄芩素对人肝癌细胞株SMMC7721裸鼠移植瘤的作用机制及其临床意义探讨论文
黄芩素对人肝癌细胞株SMMC-7721 裸鼠移植瘤的作用及机
制及其临床意义探讨
摘 要
目的:通过将肝癌细胞株 SMMC-7721 接种于 BALB/C(n/n)
裸鼠腋窝皮下,复制人肝癌细胞株SMMC-7721 裸鼠皮下移植瘤模型,
观察黄芩素干预对SMMC-7721 移植瘤组织结构、凋亡及侵袭和转移
的影响,并探讨其可能的机制,为黄芩素应用于临床提供实验依据。
方法:1.体外复苏、培养人肝癌 SMMC-7721 细胞,收集对数生长期
7
的肝癌细胞,将细胞浓度调整到 1.5×10 /ml ,将细胞细胞悬液接种裸
鼠腋窝皮下,每只裸鼠接种0.2ml 。待成瘤至长径约0.8cm 时,对裸
鼠进行随机分组并对裸鼠进行编号。实验组裸鼠每天每只腹腔注射黄
芩素20mg/kg ,连续腹腔注射14d。对照组每天每只腹腔注射二甲亚
砜(DMSO )(按黄芩素溶液浓度 5mg/ml 计算溶解黄芩素所需的
DMSO 的体积),连续腹腔注射14d。末次用药后24h 处死全部裸鼠,
充分暴露瘤体使之能被完全剥离,尽快用游标卡尺测量瘤体长径(a )
2
以及短径(b ),瘤体积V= (a+b )/2 ;瘤体称重,抑瘤率按如下公
式计算:抑瘤率(Inhibition Ratio, IR )= (1-实验组瘤重/对照组瘤
重)×100 %。将做RT-PCR 组织放入经0.1%DEPC 处理过并经高温高
压消毒的冻存管中-80℃冻存备用;将做 HE 染色及免疫组化的组织
用 4% 中性甲醛固定备用。2.用免疫组化方法检测移植瘤内 Ezrin 及
1
Survivin 蛋白的表达。3.RT-PCR 检测移植瘤中Ezrin 及Survivin mRNA
表达情况。4.HE 染色光镜下观察移植瘤的组织结构。5.实验结果用
SPSS16.0 进行统计分析,以P ﹤0.05 视为具有统计学意义。 结果:
1.实验组肝癌细胞株SMMC-7721 裸鼠移植瘤体积及重量均显著小于
对照组(P ﹤0.05 ),抑瘤率为20.80%±10.27% 。2.光镜观察,实验组
移植瘤可见较多均质红染的无结构区域;对照组可见癌细胞巢团状分
布,细胞有明显的异型性。3. 免疫组化结果示,实验组移植瘤中
Survivin、Ezrin 蛋白的表达水平与对照组相比明显下调(P ﹤0.05 )。
4.RT-PCR 结果示,实验组移植瘤Survivin、Ezrin mRNA 表达水平与
对照组相比明显下调(P ﹤0.05 ),结果与免疫组化结果一致。结论:
1.实验组肝癌细胞株SMMC-7721 裸鼠移植瘤体积和重量都明显小于
对照组,说明黄芩素对肝癌细胞株SMMC-7721 裸鼠移植瘤的生长有
抑制作用。2. 黄芩素可能下调Survivin、Ezrin mRNA 和蛋白在人肝
癌细胞株 SMMC-7721 裸鼠移植瘤中的表达。3.黄芩素下调 Survivin
的表达降低了Survivin 对凋亡的抑制作用,从而促进了肝癌细胞的凋
亡。黄芩素下调Ezrin 的表达从而抑制了其促进肝癌细胞的侵袭和转
移的能力。4.黄芩素有望成为临床治疗肝细胞癌的高效低毒药物。
关键词:黄芩素;原发性肝癌;裸鼠移;植瘤;生存素;埃兹蛋
白;凋亡
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Explore the Role and Mechanism of Baicalein on
SMMC-7721 Cell Line Xenografts in Nude Mice and Its Clinical
Significance
Abstract: Objective: The effect and its p
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