三种核酸染料应用于细菌脉冲场凝胶电泳染色的比较研究.PDF

·３８　　８· 疾病监测２０１１年５月３０日第２６卷第５期ＤｉｓｅａｓｅＳｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅ，Ｍａｙ３０，２０１１，Ｖｏｌ２６，Ｎｏ５ ◇技术与方法◇ 三种核酸染料应用于细菌脉冲场凝胶电泳 染色的比较研究 娄静，刁保卫，李伟，崔志刚，阚飙 摘要：　目的　比较Ｇｅｌｒｅｄ、ＧｏｌｄＶｉｅｗ及溴化乙锭（ＥＢ）三种染料在病原菌脉冲场凝胶电泳（ＰＦＧＥ）中的染色效果， 选择更为安全和灵敏的核酸染料，并形成标准化操作应用于病原菌分子分型监测网络ＰｕｌｓｅＮｅｔＣｈｉｎａ。方法　选择 霍乱弧菌作为评价菌株，按照病原菌分子分型监测网络（ＰｕｌｓｅＮｅｔ）的ＰＦＧＥ标准操作方案进行电泳，采用 Ｇｅｌｒｅｄ、 ＧｏｌｄＶｉｅｗ及ＥＢ三种染料分别染色，分析比较实验结果。结果　Ｇｅｌｒｅｄ染色的胶块清晰度最好，ＥＢ次之，均高于 ＧｏｌｄＶｉｅｗ；Ｇｅｌｒｅｄ染色的图谱，相邻条带边缘清晰，更容易辨别区分。ＥＢ和ＧｏｌｄＶｉｅｗ染色后必须脱色，使用Ｇｅｌｒｅｄ 染色脱色时间较短，亦可以不经过脱色步骤，但脱色后的电泳条带边缘更加锐利。结论　Ｇｅｌｒｅｄ是一种更安全、更 灵敏的核酸染料，可以取代ＥＢ应用于ＰＦＧＥ。制定了使用Ｇｅｌｒｅｄ进行ＰＦＧＥ染胶的标准方案，用于ＰｕｌｓｅＮｅｔＣｈｉｎａ 网络的ＰＦＧＥ分析。 关键词：　ＰＦＧＥ；核酸染料；安全 中图分类号：Ｒ３３１ 文献标识码：Ａ 文章编号：１００３－９９６１（２０１１）０５－０３８８－０４ ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆｔｈｒｅｅｔｙｐｅｓｏｆｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｔａｉｎｉｎｇｆｏｒＰＦＧＥ　ＬＯＵＪｉｎｇ，ＤＩＡＯＢａｏｗｅｉ，ＬＩＷｅｉ，ＣＵＩＺｈｉ ｇａｎｇ，ＫＡＮＢｉａｏ．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ，ＮａｔｉｏｎａｌＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＣｏｍｍｕｎｉｃａｂｌｅＤｉｓｅａｓｅ ＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ，ＣｈｉｎｅｓｅＣｅｎｔｅｒｆｏｒＤｉｓｅａｓｅＰｒｅｖｅｎｔｉｏｎａｎｄＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０２２０６，Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＫＡＮＢｉａｏ，Ｅｍａｉｌ：ｋａｎｂｉａｏ＠ｉｃｄｃ．ｃｎ Ａｂｓｔｒａｃｔ：　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｃｏｍｐａｒｅｔｈｅｓａｆｅｔｙａｎｄｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｒｅｅｄｙｅｓ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇＧｅｌｒｅｄ，ＧｏｌｄＶｉｅｗａｎｄＥｔｈｉｄｉｕｍ ｂｒｏｍｉｄｅ（ＥＢ），ｕｓｅｄａｓｎｕｃｌｅｉｃａｃｉｄｓｔａｉｎｉｎｇｒｅａｇｅｎｔｓｉｎｐｕｌｓｅｄｆｉｅｌｄｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ（ＰＦＧＥ）ｆｏｒｐａｔｈｏｇｅｎｓ，ａｎｄ ｏｐｔｉｍｉｚｅａｎｄｓｔａｎｄａｒｄｉｚｅｔｈｅｐｒｏｔｏｃｏｌｏｆｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｙｐｉｎｇｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｎｅｔｗｏｒｋｏｆｐａｔｈｏｇｅｎｓＰｕｌｓｅＮｅｔＣｈｉｎａ． Ｍｅｔｈｏｄｓ　 Ｖｉｂｒｉｏｃｈｏｌｅｒａｉｓｏｌａｔｅｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｆｏｒｅｖａｌｕａｔｉｏｎｐｕｒｐｏｓｅ．ＰＦＧＥｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔａｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｓｔａｎｄａｒｄ ｐｒｏｔｏｃｏｌｏｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｔｙｐｉｎｇｓｕｒｖｅｉｌｌａｎｃｅｎｅｔｗｏｒｋ（ＰｕｌｓｅＮｅｔ）．Ｔｈｅａｇａｒｏｓｅｇｅｌｓａｆｔｅｒｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｗｅｒｅｓｔａｉｎｅｄｂｙ Ｇｅｌｒｅｄ，ＧｏｌｄＶｉｅｗａｎｄＥＢ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇｅｆｆｅｃｔｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｉｔｉｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｓｔａｉｎｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｏｆＧｅｌｒｅｄｗａｓｂｅｓｔａｍｏｎｇｔｈｅｔｈｒｅｅｔｅｓｔｅｄｄｙｅｓ．ＴｈｅｏｂｓｅｒｖｅｄＤＮＡｂａｎｄｓｉｎｔｈｅｇｅｌｓｓｔａｉｎｅｄｂｙＧｅｌｒｅｄｉｓｍｏｓｔ ｃｌｅａｒ，ｆｏｌｌｏｗｅｄｂｙＥＢａ