DB21∕T 2396-2015 水稻品种抗稻瘟病基因检测 PCR法.pdfVIP

ICS 65.020.01 B 04 DB21 宁 省 地 方 标 准 DB21/T 2396 2015 水稻品种抗稻瘟病基因检测 PCR 法 2015 - 05 - 18 发布 2015 - 07 - 18 实施 辽宁省质量技术监督局 发 布 DB21/T 2396 2015 前 言 标准按照GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 标准由辽宁省农业科学院提出。 标准由辽宁省农村经济委员会归口。 标准由辽宁省农业科学院创新中心负责起草。 标准主要起草人：陆晓春、郑文静、丛玲、赵家铭、王妍、张丽霞、白春明、王春语、朱振兴、马丽、 李丹、王平、李金红等。 标准由辽宁省农业科学院创新中心负责解释。 I DB21/T 2396 2015 水稻品种抗稻瘟病基因检测 PCR 法 1 范围 本标准规定了检测水稻品种抗稻瘟病基因的PCR 检测法，包括原理、仪器设备、 剂和材料、防 污染措施、实验步骤及结果分析。 本标准适用于水稻品种中抗稻瘟病基因pita 、pid2、pid3、pik、pikp 、pikm 、piks 、pi21 、pi36、pi37 和pi5 的检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版 适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版 （包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和 验方法 GB/T 19495.2 转基因产品检测 实验室技术要求 农业部1485 号公告--4—2010 转基因植物及其产品成分检测 DNA 提取和纯化 3 术语及缩略语 下列术语及缩略语适用于本标准 3.1 正向引物：处于DNA 双链上游的引物，简称F 引物。 3.2 反向引物：处于DNA 双链下游的引物，简称R 引物。 3.3 内参引物：在聚合作用起始时，可以刺激合成另一种大分子，并与反应物以共价键形式连接的序 列。 3.4 DNA: Deoxyribonucleic acid, 脱氧核糖核酸。 3.5 PrimeSTAR HS DNA Polymerase: 高保真DNA 聚合酶。 3.6 PrimeSTAR Buffer （5×）: 5×PCR 反应液。 3.7 dNTP Mixture （10mM）: 单核苷酸混合液 （10mM）。 3.8 PCR: Polymerase chain reaction。 3.9 TAE：Tris-Cl、冰醋酸、EDTA 缓冲液。 1 DB21/T 2396 2015 3.10 Goldenview：核酸染料，替代溴化乙锭。 3.11 DNA Marker ：标准分子量的核酸标记。 3.12 bp: Base pair, 碱基对。 3.13 Tris：tris(hydroxymethyl)aminomethane，三羟甲基氨基甲烷。 4 原理 根据水稻抗病基因保守区序列设计特异性引物，提取不同水稻品种的DNA，对 样进行PCR 扩增， 依据是否扩增