第四篇第五节血液细胞染色体检验.ppt

骨髓细胞染色体检验 临床血液检验教研室 邵泽伟 副教授 基础知识简介 1960年Nowell和Hungerford发现了慢性粒细胞白血病特异性染色体异常，即Ph染色体，从此推动了细胞遗传学在肿瘤细胞学上的广泛应用，促进了血液肿瘤分子生物学的发展。 血细胞染色体检验技术 主要包括染色体非显带技术、染色体显带技术、染色体高分辨技术、姐妹染色单体互换技术、染色体脆性部位显示技术和早熟凝集染色体技术等。 80年代又发展了染色体原位杂交技术(FISH)，这一技术将分子探针与染色体杂交，拓展了检测范围，提高了检测的灵敏度。 自动化染色体分析技术提供了菜单式操作，简单易行，在资料存储、染色体图像处理和核型分析方面显示了独特优势。 一、染色体非显带技术 (一)原理 染色体制备的关键是获得足够的分裂中期细胞。如骨髓可直接得到分裂中期细胞，而外周血淋巴细胞需经体外培养，植物凝集素（PHA）刺激细胞分裂以获得分裂中期细胞。骨髓细胞常规染色体制备方法包括直接法和培养法两种。 直接法 1．直接法： 抗凝骨髓标本不经培养，以PBS稀释后加人秋水仙素“阻留”中期细胞，经低渗液处理后，再经预固定、固定后即可染色作镜检。（秋水仙素能干扰有丝分裂纺锤体形成，使细胞“阻留”在分裂中期，增加中期细胞数目。低渗处理则使染色体彼此铺展开，便于分析。） 短期培养法 抗凝骨髓标本在含小牛血清的培养液中于37℃培养24或48h，加入秋水仙素“阻留”中期细胞，其他同直接法。 二、染色体常规显带技术 显带染色体(banding chromosome) ：染色体经过某种特殊的处理或特异的染色后，染色体上可显示出一系列连续的明暗条纹，称为显带染色体。 1971年巴黎会议确定的四种显带技术是奎丫染色法、Giemsa法、逆相Giemsa法和着丝粒区异染色质法，即Q带、G带、R带和C带。 (一)原理 1．G显带（Giemsa法）： DNA上富含A-T碱基对的DNA和组蛋白结合紧密，和染料亲和力较强，呈深带；而富含G-C碱基对的区段结合的蛋白质与染料亲和力降低，呈浅带。这样染色体上可显示出一系列连续的明暗条纹。 2．R显带(逆相Giemsa法)： 带纹与Q带、G带正好相反，即前者的阳性带相当于后者的阴性带，而前者的阴性带则相当于后者的阳性带。R带按制备方法不同可分为荧光R带和姬姆萨R带两种类型。 (二)显带染色体的命名 显带染色体上的明暗条纹称作带(band)。染色体上有明显而恒定的形态特征，如着丝粒和某些特别显著的带，称作界标(1andmark)。两个界标之间的区域称为染色体区(region)。 区的划分是以着丝粒开始向短臂(phocomelic arm，p)或长臂(q)的臂端延伸，依次编为l区、2区、3区等。用作界标的带就是该区的l号带，例如6p23，即表示第6号染色体短臂，2区，3带。 在表示一个指定的带时需要四项内容，即染色体号、臂号、区号和带号。如果一个带需要再分，就称为亚带(subband)，亚带的描述就是在带的后面加一小数点，再写出指定的亚带数。如6p23.1 ， 即指6号染色体短臂，2区3带的第l亚带。如果亚带又被再划分，则只在亚带后加数字，不再加标点。 三、临床评价 (一)染色体异常(chromosome aberration) 是指染色体数量异常和结构异常，又称染色体畸变。 1．染色体数目异常 ①多倍体(polyploid)：人类生殖细胞染色体为23条，体细胞染色体为46条，称二倍体(diploid)(2n)。在某些病理情况下，细胞染色体数目成倍增加，称为多倍体，如三倍体(triploid)(3n)，四倍体(tetraploid)(4n)等。在恶性血液病中常见有多倍体细胞。 ②非整倍体(aneuploid)：染色体数目增加或减少不是成倍的，称为非整倍体。 少于46条者称亚二倍体(hypodiploid)，少于69条者为亚三倍体(hypotriploid)；多于46条者称为超二倍体(hyperdiploid)，多于69条者称超三倍体(hypertriploid)。 如果染色体数是2n，但不是正常的23对，而是个别染色体增加，其他染色体相应减少，称为假二倍体(pseudodiploid)。在急